本試劑盒基于間接ELISA檢測原理，酶標板微孔固相包被純化的軍團菌特異性抗原，加入待測樣本與標準品后，樣本內(nèi)的軍團菌IgG抗體可與固相抗原特異性結(jié)合，洗板去除未結(jié)合成分，隨后加入酶標記抗人IgG抗體，與結(jié)合在抗原上的IgG抗體特異性反應，孵育洗滌后加入顯色底物，在酶的催化下產(chǎn)生有色產(chǎn)物，終止顯色后測定吸光度，通過標準曲線擬合，精準測定樣本中軍團菌抗體IgG的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人軍團菌抗體IgG(LP Ab-IgG)ELISA試劑盒
英文名稱：LP Ab-IgG Elisa Kit
貨號：Y-E598
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低可檢出抗體濃度 0.25AU/mL
檢測范圍：0.5–16AU/mL
反應時間：一抗孵育 75min，二抗 50min，底物顯色 12min，總流程 145min
保存條件：試劑盒 2–8℃避光；已稀釋好的工作液當日用完不可留存
顯色系統(tǒng)：HRP 標記二抗催化 TMB 顯色
檢測波長：450nm，參比 620nm
標準曲線繪制：標準品 6 個梯度濃度，OD 值采用線性回歸擬合曲線計算樣本抗體含量
注意事項：加樣順序不可顛倒；顯色時間嚴格把控，超時會造成背景偏高；標本需離心去除紅細胞雜質(zhì)
實驗前準備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標準品復溶 / 梯度稀釋：
凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。
待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。
取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標記
酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設(shè)置雙復孔降低誤差）。
實驗步驟如下：
樣本采集處理
外周血樣本常溫放置 40min 析出血清，3500rpm 離心 12min 吸取上清；胸水、肺泡灌洗液樣本需過濾除菌后再離心取上清，樣本避免微生物污染。
試劑解凍稀釋
試劑盒全部試劑室溫回溫 28min；20× 濃縮洗滌液按照 1:19 比例稀釋為 1× 工作洗滌液，攪拌均勻備用。
標準品系列稀釋
凍干 IgG 標準品加稀釋液溶解定容，做 6 組倍比稀釋，各梯度標準品依次加入對應微孔 50μL，設(shè)置陰性對照孔與空白對照孔。
樣本共孵育加液
待測樣本孔加入樣本 50μL，同步加入酶標記抗人 IgG 結(jié)合液 50μL，封板密封，37℃水浴恒溫孵育 70min。
洗板洗滌步驟
傾倒孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液浸潤 35s，拍干，循環(huán)洗板 6 次，最后一次洗板后充分扣干微孔殘留液體。
底物顯色操作
每孔添加 TMB 顯色液 100μL，避光環(huán)境 37℃孵育 18min，觀察微孔液體變?yōu)闇\藍色即可進入終止步驟。
終止讀值計算
加入終止液終止顯色，450nm 波長測定吸光度，依托標準曲線計算樣本軍團菌 IgG 抗體含量，超出曲線范圍樣本需稀釋復測。
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