本試劑盒采用經(jīng)典雙抗體夾心ELISA原理，在酶標(biāo)板微孔內(nèi)包被軍團(tuán)菌特異性捕獲抗體，加入待測(cè)樣本和梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本中的軍團(tuán)菌抗原可與包被抗體特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記的軍團(tuán)菌檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定的夾心式免疫復(fù)合物，后續(xù)通過底物催化顯色、終止反應(yīng)，檢測(cè)各孔吸光度數(shù)值，依托標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中軍團(tuán)菌抗原的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人軍團(tuán)菌抗原(LP Ag)ELISA試劑盒
英文名稱：LP Ag Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E583
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè) 0.05ng/mL 軍團(tuán)菌抗原
檢測(cè)范圍：0.1–8ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本結(jié)合 60min，酶標(biāo)抗體 40min，顯色 10min，整體 95min
保存條件：全套試劑 2～8℃冷藏，洗滌濃縮液室溫存放，結(jié)冰失效
顯色系統(tǒng)：TMB 顯色液 A、B 液混合使用
檢測(cè)波長(zhǎng)：450/630nm 雙波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，Logistic 擬合曲線定量樣本抗原含量
注意事項(xiàng)：尿液、肺泡灌洗液樣本需過濾后上樣；渾濁樣本必須離心澄清；加樣槍頭一次性更換防交叉污染
儲(chǔ)存與有效期：
未開封整套試劑盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷凍；有效期 12 個(gè)月。
開封后保存
剩余酶標(biāo)板條：自封袋密封，內(nèi)置干燥劑 2～8℃避光；1 個(gè)月內(nèi)用完。
HRP 酶結(jié)合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。
濃縮洗滌液：2～30℃常溫保存，結(jié)晶溫水溶解不影響效果。
復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品：分裝 - 20℃凍存，避免反復(fù)凍融，1 個(gè)月內(nèi)使用。
過期試劑禁止使用。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
樣本前處理
痰液樣本加入等量樣本裂解液震蕩混勻，靜置 15min 離心取上清；血清、尿液樣本直接離心去除雜質(zhì)，上清用于檢測(cè)。
試劑準(zhǔn)備回溫
酶標(biāo)板條拆封后置于室溫，其余試劑全部室溫平衡 35min，按比例稀釋濃縮洗滌液，搖晃混勻。
抗原標(biāo)準(zhǔn)品稀釋
軍團(tuán)菌抗原標(biāo)準(zhǔn)品溶解后梯度稀釋 8 個(gè)濃度梯度，每孔加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，空白孔只加稀釋緩沖液。
抗原抗體共孵育
待測(cè)樣本 50μL 加入微孔，再加入生物素化抗軍團(tuán)菌抗原抗體 50μL，密封酶標(biāo)板，37℃孵育 65min。
反復(fù)洗板去除游離物
甩掉孔內(nèi)液體，洗滌液加滿每孔，浸泡 45s，拍干，連續(xù)洗板 4 次，吸水紙徹底吸干板條水分。
酶促顯色反應(yīng)
每孔加入鏈霉親和素 - HRP 溶液 100μL，37℃孵育 25min；洗板 5 次后添加 TMB 顯色液 100μL，避光顯色 16min。
終止顯色定量
滴加終止液終止反應(yīng)，450nm 測(cè)定 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線定量樣本內(nèi)軍團(tuán)菌抗原濃度，超標(biāo)樣本稀釋重測(cè)。
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關(guān)鍵字： 人軍團(tuán)菌抗原;LP Ag;ELISA試劑盒;
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