本試劑盒運用間接ELISA檢測原理,酶標板固相包被斑疹傷寒特異性抗原,加入待測樣本和標準品,樣本中的抗斑疹傷寒抗體與固相抗原特異性結(jié)合,洗板去除未結(jié)合組分,加入酶標記抗人二抗發(fā)生特異性結(jié)合反應,經(jīng)底物顯色、終止反應后檢測吸光度,依據(jù)標準曲線精準定量樣本中抗斑疹傷寒抗體水平。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)ELISA試劑盒
英文名稱:anti-typhus antibody Elisa Kit
貨號:Y-E555
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低滴度 1:25
檢測范圍:定性判定陰陽性,定量 0.6–30AU/mL
反應時間:樣本孵育 95min,酶結(jié)合物 60min,顯色 18min,總 173min
保存條件:2~8℃避光密封保存,拆分板條務必防潮
顯色系統(tǒng):HRP-TMB 顯色體系
檢測波長:450nm
標準曲線繪制:陽性參考品倍比稀釋繪制曲線判定抗體滴度
注意事項:恙蟲病血清存在交叉干擾;終止液含強酸,操作做好防護
實驗前準備工作:

1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標簽標注比例用去離子純水稀釋(常見 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標準品復溶 / 梯度稀釋:
凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品,單獨標記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復凍融。
待測樣本預處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴重樣本棄用。
2. 耗材與設備準備
設備:恒溫 37℃孵育箱、酶標儀(450nm 主波長,630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(或手動洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染,移液槍提前校準。
取出本次實驗所需酶標板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標記
酶標板做好分區(qū)標記:空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔(所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差)。
實驗步驟如下:

血清樣本處理
靜脈血分離血清,無細菌污染,4℃短期存放不超過 3 天,長期分裝冷凍保存。
試劑盒試劑預處理
全部試劑室溫放置 31min,濃縮洗滌液按比例蒸餾水稀釋混勻備用。
標準品加孔稀釋
斑疹傷寒抗體標準品復溶倍比稀釋 6 梯度,每孔加入 50μL 標準品溶液,設置陰性對照孔。
一步法孵育反應
待測樣本 50μL,加入酶標記斑疹傷寒抗原液 50μL,密封酶標板,37℃孵育 50min。
微孔洗滌流程
棄液后洗滌液浸泡 30s 拍干,重復洗板 5 次,每次拍干板條多余液體。
底物顯色反應
每孔加入顯色底物液 100μL,避光 37℃顯色 12min。
終止結(jié)果判定
終止液終止酶反應,450nm 測定 OD 值,對照臨界值判定抗體陰陽性。
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