本試劑盒基于間接ELISA檢測(cè)原理，以固相包被的人肝腎微粒體特異性抗原為捕獲載體，待測(cè)樣本中的人抗肝腎微粒體抗體可與固相抗原特異性結(jié)合，形成固相抗原-樣本抗體免疫復(fù)合物；經(jīng)洗滌洗去未結(jié)合成分后，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG二抗進(jìn)行特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，終止反應(yīng)后通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值，樣本中LKM抗體含量越高，顯色越深，以此實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中該抗體的精準(zhǔn)定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人抗肝腎微粒體抗體(LKM)ELISA試劑盒
英文名稱：LKM Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E474
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 0.8AU/mL
檢測(cè)范圍：1.25AU/mL～20AU/mL
反應(yīng)時(shí)間：一抗結(jié)合孵育 90min；酶結(jié)合物孵育 45min；底物顯色 12min
保存條件：試劑盒整體 2～8℃冷藏，嚴(yán)禁冷凍；剩余微孔板干燥劑密封 2～8℃放置
顯色系統(tǒng)：雙組份 A+B TMB 顯色體系
檢測(cè)波長(zhǎng)：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng) 450nm 直接測(cè)定
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，線性回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，OD 值代入公式計(jì)算樣本抗體含量
注意事項(xiàng)：不可反復(fù)凍融待測(cè)血清；洗板步驟務(wù)必充分，減少非特異性吸附；終止液具有腐蝕性，避免接觸皮膚
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
樣本預(yù)處理：分離無(wú)溶血人血清，以樣本稀釋液 1:80 稀釋，顛倒混勻 8 次，室溫放置 8min，渾濁樣本 3000r/min 離心 10min 取上清使用。
孔位規(guī)劃加樣：酶標(biāo)板拆取所需條板，標(biāo)注孔類型，空白孔加稀釋液 100μL，陰陽(yáng)性對(duì)照孔各加對(duì)照品 100μL，樣本孔加入稀釋上清 100μL。
一步共混加酶標(biāo)抗體：所有反應(yīng)孔直接加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗原工作液 100μL，封板后水平搖晃板面 15s 混合液體。
溫育結(jié)合：37℃水浴環(huán)境避光孵育 45min，水浴液面沒(méi)過(guò)板孔 1/2 高度，保證受熱均勻。
洗板操作：棄去孔中液體，每孔注滿洗滌液，靜置 20s 后倒扣拍干，連續(xù)洗板 4 次，每次拍干力度一致。
顯色操作：每孔加入 TMB 顯色底物混合液 100μL，避光室溫顯色 12min，觀察孔內(nèi)藍(lán)色深淺變化。
終止與測(cè)定：加入 2M 硫酸終止液 50μL 終止反應(yīng)，輕板混勻，酶標(biāo)儀 450nm 單波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度，根據(jù)臨界值判定陰陽(yáng)性結(jié)果。
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關(guān)鍵字： 人抗肝腎微粒體抗體;LKM;ELISA試劑盒;
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