本試劑盒采用經(jīng)典雙抗體夾心ELISA檢測技術(shù)，酶標板包被F1+2特異性抗體，待測樣本中的凝血酶原片段F1+2與固相抗體特異性免疫結(jié)合，加入酶標記二抗形成夾心復(fù)合物，充分洗滌后進行底物顯色，終止反應(yīng)后檢測OD值，依據(jù)標準曲線精準計算樣本中F1+2的濃度含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.08 nmol/L

檢測范圍：0.2nmol/L～12nmol/L

反應(yīng)時間：室溫孵育 116min，酶標二抗 57min，顯色 17min，總 190min

保存條件：全套試劑 2～8℃避光密封

顯色系統(tǒng)：TMB 雙組份顯色液

檢測波長：450nm，參比 620nm

標準曲線繪制：7 個濃度梯度，Logistic 回歸繪制標準曲線

注意事項：嚴禁樣本發(fā)生凝血，一旦凝固樣本直接作廢
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

工作液調(diào)配：濃縮洗滌液稀釋使用，梯度稀釋 F1+2 標準品，抗凝血漿樣本離心分離上清。

加樣上板：酶標板對應(yīng)微孔加入標準品、待測樣本、空白試劑 100μL。

酶結(jié)合物添加：每孔加入酶標記 F1+2 抗體 100μL，密封封板膜。

免疫孵育：37℃避光孵育 68min。

洗板去污：棄液后洗液浸泡 30s 拍干，連續(xù)洗滌 4 次。

底物顯色：加入顯色工作液，避光顯色 13min。

終止讀數(shù)：終止液終止顯色，酶標儀 450nm 讀數(shù)，繪制標準曲線計算 F1+2 含量。