本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，預(yù)先將特異性抗人平滑肌肌球蛋白抗體包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi)，形成固相抗體。檢測(cè)時(shí)，樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的人平滑肌肌球蛋白會(huì)與固相抗體特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合物質(zhì)后，加入酶標(biāo)記的二抗形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌去除游離組分，加入底物液進(jìn)行顯色反應(yīng)，最后加入終止液終止反應(yīng)，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度值，吸光度值與樣本中人平滑肌肌球蛋白的含量呈正相關(guān)，以此可精準(zhǔn)計(jì)算樣本中待測(cè)指標(biāo)的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E2538 |
英文名稱 | SMM ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低可檢出 0.12ng/mL 樣本中 SMM 含量
檢測(cè)范圍：0.35ng/mL～22.4ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 65min，二抗孵育 50min，底物顯色 18min，終止后立即讀數(shù)
保存條件：未拆封試劑盒 2～8℃避光密封存放；開(kāi)封后板條干燥劑封存 2～8℃，有效期 1 個(gè)月
顯色系統(tǒng)：TMB 單組份顯色液，酶促底物顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：主波長(zhǎng) 450nm，參比波長(zhǎng) 630nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 X 軸，對(duì)應(yīng) OD 吸光度值為 Y 軸，四參數(shù) Logistic 擬合生成標(biāo)準(zhǔn)曲線
注意事項(xiàng)：血清樣本需避免反復(fù)凍融超過(guò) 2 次；洗板每孔浸泡時(shí)長(zhǎng)不得低于 30 秒，防止非特異性結(jié)合干擾結(jié)果
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋?zhuān)ǔＲ?jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋?zhuān)?/span>
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋?zhuān)瑴啙針颖?12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
提前取出試劑盒所有組分，室溫平衡 30min，配制洗滌液、樣本稀釋液、酶結(jié)合工作液；取出預(yù)包被 96 孔板，標(biāo)記樣本孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔。
標(biāo)準(zhǔn)品孔依次加入梯度稀釋好的 SMM 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；樣本孔加入稀釋后待測(cè)血清 / 上清樣本 50μL；空白孔不加任何液體。
每孔直接加入一步法酶標(biāo)記抗體工作液 100μL，封板膜密封酶標(biāo)板，輕輕震蕩混勻。
酶標(biāo)板置于 37℃恒溫孵育箱避光孵育 60min，全程避免強(qiáng)光直射。
小心撕掉封板膜，棄去孔內(nèi)全部液體，每孔加滿洗滌緩沖液，靜置 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，最后一次拍干孔內(nèi)殘留液體。
每孔現(xiàn)配現(xiàn)加顯色底物 A 液、B 液各 50μL，輕柔晃動(dòng)板子混勻，37℃避光顯色 15min。
每孔快速加入終止液 50μL 終止顯色反應(yīng)，15min 內(nèi)使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔 OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算樣本 SMM 濃度。
關(guān)鍵字： 人平滑肌肌球蛋白;SMM;ELISA試劑盒;
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