本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，酶標板固定純化的人羥賴氨酸抗原。檢測體系中，樣本內(nèi)的羥賴氨酸與固相抗原競爭結(jié)合酶標特異性抗體，孵育洗滌后進行底物顯色，待測物含量與顯色深度呈負相關，終止反應后測定吸光度，通過標準曲線換算出樣本中羥賴氨酸的濃度含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出限 0.12μmol/L

檢測范圍：0.36μmol/L～23.04μmol/L

反應時間：樣本孵育 72min，二抗溫育 57min，顯色 20min

保存條件：未拆封 2～8℃；開封試劑密封冷藏，保質(zhì)期縮短至 30 天

顯色系統(tǒng)：雙組份現(xiàn)配 TMB 顯色體系

檢測波長：450nm 直接測定

標準曲線繪制：五點梯度標準品，非線性四參數(shù)擬合

注意事項：膠原水解樣本需充分離心取上清，固體殘渣禁止加入微孔孔內(nèi)
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒試劑室溫回溫 28min，配制洗滌工作液；取出包被板條劃分實驗孔組。

梯度 Hyl 標準品 50μL 加入標準孔，預處理待測樣本 50μL 加入樣本孔，空白孔留空。

非空白孔加入一步法酶聯(lián)檢測抗體 100μL，封板后輕微震蕩。

37℃避光孵育 60min，規(guī)避光照干擾。

棄液洗板 5 次，每次浸泡 32s，反復洗滌去除未結(jié)合組分，拍干板條。

每孔加入顯色 A 液、B 液各 50μL，37℃避光顯色 15min。

加入終止液 50μL 混勻，10min 內(nèi) 450nm 檢測吸光值，定量羥賴氨酸濃度。