本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA核心原理，微孔板包被4931408D14基因編碼蛋白特異性捕獲抗體，孵育過程中樣本內(nèi)靶蛋白與抗體特異性結(jié)合，再加入酶標記檢測抗體構(gòu)建免疫夾心結(jié)構(gòu)，洗滌后催化底物顯色，吸光度數(shù)值隨靶蛋白濃度升高而增大，對照標準曲線即可精準定量檢測樣本中該靶蛋白的表達水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出限 0.025ng/mL

檢測范圍：0.1ng/mL–9ng/mL

反應(yīng)時間：一抗 65min，二抗 35min，顯色 10min，合計 110min

保存條件：未拆封 2–8℃，拆封后各組分分類密封冷藏

顯色系統(tǒng)：雙組分 TMB 顯色

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：七梯度標準品，四參數(shù) Logistic 回歸建模

注意事項：洗滌液稀釋用水需為去離子純水，不可用自來水
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

樣本制備：待測體液 / 細胞上清樣本離心取上清，按說明書比例稀釋混勻；

加樣上板：酶標板各孔依次添加標準品、待測樣本、空白稀釋液，每孔 100μL；

一步孵育結(jié)合：直接加入酶標記工作液，密封后 37℃孵育 62min；

多次洗板：棄凈孔內(nèi)液體，洗滌液注滿微孔靜置 32s，拍干，洗板 6 次；

底物顯色：加入顯色混合液，避光環(huán)境下顯色 13min；

終止反應(yīng)：滴加終止液終止反應(yīng)，輕搖酶標板混勻；

檢測分析：酶標儀檢測 450nm OD 值，對照標準曲線計算靶標表達量。