本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，微孔板預(yù)先包被人親環(huán)素A(CyPA)特異性抗體，待測(cè)樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的CyPA抗原可與固相抗體特異性免疫結(jié)合，洗滌純化體系后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成夾心免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，吸光度數(shù)值與樣本中CyPA濃度成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒
英文名稱：CyPA ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2981
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低可檢出 2.1pg/mL
檢測(cè)范圍：12pg/mL ~ 650pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：37℃孵育 69min，二抗孵育 46min，避光顯色 16min，總用時(shí) 2h11min
保存條件：未開啟 2~8℃，濃縮試劑分裝后 - 20℃可長(zhǎng)期保存，開封板條 1 周內(nèi)用完
顯色系統(tǒng)：預(yù)裝 TMB 顯色液，2mol/L H?SO?終止反應(yīng)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 單波長(zhǎng)讀數(shù)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：半對(duì)數(shù)坐標(biāo)擬合，8 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度
注意事項(xiàng)：細(xì)胞壞死會(huì)導(dǎo)致 CyPA 大量釋放，壞死上清樣本需稀釋檢測(cè)；洗板不可省略步驟
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒試劑室溫靜置 25min，稀釋濃縮洗滌液，梯度稀釋 CyPA 標(biāo)準(zhǔn)品，區(qū)分空白、標(biāo)品、樣本孔。
標(biāo)準(zhǔn)孔加入 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)液；樣本孔加 50μL 稀釋液 + 10μL 待測(cè)樣本；空白孔無加樣。
檢測(cè)孔加入酶標(biāo)記抗 CyPA 抗體 100μL，封板 37℃孵育 57min。
棄液洗板，每孔注滿洗滌液靜置 30s，甩干循環(huán) 5 次，微孔板拍干。
顯色 A、B 液各 50μL 加入每孔，混勻避光顯色 14min。
加入終止液 50μL 終止并混勻。
450nm 測(cè)定 OD 值，計(jì)算 CyPA 含量。
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關(guān)鍵字： 人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A;CyPA;ELISA試劑盒;
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