本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA技術(shù)原理，微孔板包被人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)特異性抗體，待測樣本中的HPRI抗原與固相抗體特異性結(jié)合，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品梯度孵育后，洗滌去除未結(jié)合組分，加入酶標(biāo)記檢測抗體形成夾心免疫復(fù)合物，顯色終止后測定吸光度，數(shù)值高低對應(yīng)樣本中HPRI的含量，可精準(zhǔn)定量檢測。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)ELISA試劑盒
英文名稱：HPRI ELISA Kit
貨號：Y-E2716
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 5.8pg/mL
檢測范圍：33pg/mL ~ 1280pg/mL
反應(yīng)時間：樣本孵育 74min，二抗溫育 50min，底物顯色 19min，合計 2h23min
保存條件：未拆封試劑盒 2～8℃，濃縮試劑分裝凍存可延長有效期，開封后盡快使用
顯色系統(tǒng)：預(yù)裝 TMB 顯色底物，強酸終止液終止
檢測波長：450nm 主波長，650nm 參比波長
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：半對數(shù)線性擬合，8 個標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度
注意事項：樣本中 RNase 會降解靶標(biāo)蛋白，采樣后立即添加蛋白酶抑制劑；避免核酸污染試劑
實驗前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實驗步驟如下：
試劑盒組分室溫回溫 27min，稀釋濃縮洗滌液，梯度稀釋 HPRI 標(biāo)準(zhǔn)品，區(qū)分各類檢測孔。
標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 50μL 梯度 HPRI 標(biāo)準(zhǔn)液；樣本孔加 50μL 稀釋液 + 10μL 樣本；空白孔無加樣。
檢測孔加入酶標(biāo)記抗 HPRI 抗體 100μL，封板 37℃孵育 60min。
棄液后洗滌液浸泡每孔 32s 甩干，循環(huán)洗板 5 次，板條拍干。
顯色雙液各 50μL 混勻添加，避光顯色 15min。
加入終止液 50μL 終止并混勻酶促反應(yīng)。
450nm 測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算 HPRI 含量。
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