本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，將抗人pMHC特異性單克隆抗體固定于酶標(biāo)板孔底，加入待測(cè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)品后，樣本中的pMHC復(fù)合物與包被抗體特異性免疫結(jié)合，經(jīng)洗滌去除非特異性結(jié)合物質(zhì)，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的配對(duì)抗體形成免疫復(fù)合物，充分反應(yīng)后洗板，加入顯色底物孵育顯色，通過終止液終止顯色反應(yīng)后，檢測(cè)各孔吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量分析樣本中人pMHC復(fù)合物的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)ELISA試劑盒
英文名稱：pMHC ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2835
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出限≤0.05ng/mL
檢測(cè)范圍：0.1ng/mL～8ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：一抗結(jié)合 90min，酶標(biāo)二抗溫育 50min，避光顯色 12min
保存條件：整套試劑盒 2～8℃冷藏，嚴(yán)禁冷凍凍裂包被板；濃縮洗滌液室溫存放
顯色系統(tǒng)：雙組分 A、B 液 TMB 顯色體系，酸性終止液終止反應(yīng)
檢測(cè)波長：讀數(shù)波長 450nm，校正波長 600nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：采用線性回歸法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，剔除偏差過大標(biāo)品孔數(shù)據(jù)
注意事項(xiàng)：操作全程盡量避光，酶結(jié)合物開蓋后易失活，單次取用快速封蓋
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒所有組分提前室溫放置 25min，取出預(yù)包被 pMHC 捕獲抗體酶標(biāo)板，棄凈孔中液體，洗板 1 次，徹底拍干微孔。
劃分實(shí)驗(yàn)孔位：空白對(duì)照孔、系列標(biāo)準(zhǔn)品孔、臨床待測(cè)樣本孔；標(biāo)準(zhǔn)品孔添加倍比稀釋 pMHC 標(biāo)準(zhǔn)品 60μL，樣本孔加入預(yù)處理待測(cè)上清 60μL，空白孔補(bǔ)稀釋液。
直接向全部反應(yīng)孔加入酶標(biāo)記二抗工作液 60μL，覆膜封板，37℃濕盒避光孵育 70min。
去除封板膜，傾倒廢液，洗板液注滿每孔浸泡 40s 后棄液，連續(xù)洗板 6 輪，孔口朝下用力拍干水分。
按配比配制顯色混合底物液，每孔添加 100μL 底物混合液，室溫避光顯色 12min。
每孔加注終止反應(yīng)液 50μL，輕微震蕩板體，終止顯色。
酶標(biāo)儀調(diào)至 450nm 檢測(cè)波長，測(cè)定每孔 OD 數(shù)值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線換算樣本 pMHC 復(fù)合物含量。
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關(guān)鍵字： 人肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物;pMHC;ELISA試劑盒;
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