本試劑盒運(yùn)用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心檢測(cè)技術(shù)原理，酶標(biāo)板微孔固定抗人SMAF特異性抗體，加入待測(cè)樣本后，樣本中的SMAF因子與固相抗體特異性免疫結(jié)合，洗滌純化反應(yīng)體系，加入HRP標(biāo)記二抗形成夾心復(fù)合物，充分反應(yīng)后洗去未結(jié)合抗體，加入底物顯色，終止后檢測(cè)吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品曲線，可精準(zhǔn)定量樣本中人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒
英文名稱：SMAF ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2663
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出 0.14pg/mL
檢測(cè)范圍：0.25～16pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：37℃孵育 100min，酶標(biāo)二抗 60min，顯色 20min
保存條件：全部組分 2～8℃避光存放，底物液嚴(yán)禁光照直射
顯色系統(tǒng)：雙組分 TMB 顯色，酸性終止液終止
檢測(cè)波長：僅 450nm 檢測(cè)吸光值
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7 個(gè)梯度濃度，去除離群值后四參數(shù)擬合
注意事項(xiàng)：細(xì)胞上清樣本需 0.22μm 濾膜過濾去除細(xì)胞碎屑
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒全部試劑室溫平衡 35min，SMAF 包被板棄保護(hù)液，洗滌緩沖液洗孔 2 次，拍干備用。
設(shè)置空白孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)孔、細(xì)胞上清樣本孔；標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 SMAF 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加入稀釋上清液 50μL，空白孔加稀釋液。
每孔加入酶標(biāo)二抗 50μL，覆膜封板，37℃孵育 65min。
棄廢液，洗滌液加滿每孔靜置 30s 棄除，洗板 5 次，吸水紙徹底拍干。
每孔依次加顯色 A、B 液各 50μL，避光室溫顯色 14min。
加入終止液 50μL 混勻終止酶反應(yīng)。
酶標(biāo)儀 450nm 讀取 OD 值，定量計(jì)算 SMAF 因子濃度。
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關(guān)鍵字： 人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子;SMAF;ELISA試劑盒;
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