本試劑盒基于實時熒光PCR檢測技術(shù)，特異性針對牛巨細(xì)胞病毒核酸序列設(shè)計特異性引物與探針，可精準(zhǔn)檢測牛血液、組織、呼吸道分泌物等各類臨床樣本中的病毒核酸。試劑盒配套優(yōu)化的PCR反應(yīng)體系，具備靈敏度高、特異性強(qiáng)、抗干擾能力優(yōu)異的特點，可有效區(qū)分牛巨細(xì)胞病毒與其他牛源皰疹病毒，杜絕交叉反應(yīng)。適用于牛群隱性感染、潛伏感染及急性感染的快速篩查，可為牛群病毒性疫病防控、流行病學(xué)調(diào)查及養(yǎng)殖檢疫提供精準(zhǔn)的實驗數(shù)據(jù)支撐。
產(chǎn)品名稱 | 同牛皰疹病毒型牛巨細(xì)胞病毒PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P013929 |
英文名稱 | Bovine Cytomegalovirus（BCV，3）PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
采用特異性 Taqman 熒光探針結(jié)合病毒保守基因序列，樣本核酸經(jīng)高溫變性、低溫退火延伸擴(kuò)增靶標(biāo)片段，擴(kuò)增過程探針?biāo)忉尫艧晒庑盘?，依靠熒光?qiáng)度定性判定樣本含牛巨細(xì)胞病毒。
提取病牛血液、鼻拭子中總 DNA，引物特異性鎖定牛巨細(xì)胞病毒衣殼蛋白編碼基因，普通 PCR 擴(kuò)增目的條帶，瓊脂糖凝膠電泳觀察特異性條帶完成病原檢出。
一步法反轉(zhuǎn)錄熒光 PCR 體系，裂解液同步完成病毒核酸釋放與蛋白滅活，針對病毒 DNA 聚合酶基因擴(kuò)增，通過 Ct 值區(qū)分陽性感染樣本與陰性健康樣本。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實驗后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實驗室；
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實驗室臺面、移液器紫外過夜消毒。
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關(guān)鍵字： 同牛皰疹病毒型牛巨細(xì)胞病毒;PCR檢測試劑盒;
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