本試劑盒專(zhuān)為牛乳頭瘤病毒核酸檢測(cè)研發(fā)，通過(guò)PCR特異性擴(kuò)增技術(shù)，靶向識(shí)別病毒基因組保守片段，可檢測(cè)牛皮膚疣狀病變組織、體表黏膜樣本中的病毒核酸。試劑盒體系耐受性強(qiáng)，可適配病變組織復(fù)雜樣本檢測(cè)，特異性高，可精準(zhǔn)區(qū)分不同亞型乳頭瘤病毒。主要用于牛皮膚乳頭瘤病的臨床確診、無(wú)癥狀感染篩查、養(yǎng)殖種群疫病凈化，為牛體表腫瘤性疫病防控提供可靠檢測(cè)依據(jù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 牛乳頭瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P013938 |
英文名稱(chēng) | Bovine Papillomavirus(BoPV)PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
提取病牛皮膚疣組織 DNA，引物靶向病毒 L1 衣殼保守基因，常規(guī) PCR 擴(kuò)增，電泳出現(xiàn)特異性條帶判定病毒核酸陽(yáng)性。
Taqman 熒光定量 PCR 擴(kuò)增病毒 E6 致癌基因，依據(jù)熒光 Ct 值半定量皮膚組織內(nèi)牛乳頭瘤病毒拷貝數(shù)。
磁珠富集微量病毒 DNA 后進(jìn)行多重 PCR，同步區(qū)分多種亞型牛乳頭瘤病毒，適配皮膚、黏膜疣狀病灶樣本。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無(wú)抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào)，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照：
7號(hào)管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽(yáng)性對(duì)照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號(hào)管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項(xiàng)?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽(yáng)性模板僅在生物安全柜開(kāi)蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過(guò) 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測(cè)，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室；
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過(guò)夜消毒。
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