細胞名稱：Psi2 DAP 小鼠胚胎成纖維細胞
組織來源：正常胚胎
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形 態(tài)：貼壁；成纖維細胞
背 景：這株細胞生成一種可以感染小鼠細胞的載體。 Psi2 DAP細胞生成的載體編碼了人類胎盤堿性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。 這株細胞通過Psi2細胞插入一個重組的逆轉錄病毒(DAP)基因組衍生而來。 被這種Psi2 DAP產生的載體感染的細胞表達的磷酸酯酶可用組織化學方法檢測，可以用作體內追蹤他們命運的標記。 這些細胞也可能產生輔助病毒。
Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。
formazan結晶的生成量僅與活Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細胞)數目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間）。
3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。
4.比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細胞)生長曲線。
關鍵字： Psi2DAP_小鼠胚胎成纖維細胞_小鼠細胞系_
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