細胞系
溶解方法
可以溶于DMSO或DMF。
反應時間
50 mM，25℃ 反應1 h
應用
用DMSO配置濃度為50mM的biotin-HPDP，然后用DMF 將其稀釋成終濃度為4 mM的溶液。蛋白樣品溶液與biotin-HPDP溶液體積比按照1：3混合后25℃孵育1小時，最后用抗壞血酸溶液（50mM）(抗壞血酸：蛋白樣品=1:50)來終止反應。隨后，多余的biotin-HPDP可以通過加入兩倍體積的丙酮（-20℃）在20℃下孵育20min去除。每毫克蛋白加入15ul的鏈霉親和素瓊脂糖來純化生物素化蛋白，室溫孵育1h。用10倍體積含NaCl的中性緩沖液清洗磁珠，每次洗脫間隙室溫200g離心5秒。用洗脫液與磁珠孵育回收結合的蛋白。用SDS-PAGE以及特定的抗體來分析感興趣的蛋白。
動物模型
劑量
注意事項
References:
[1.][1].Samie R. Jaffrey and Solomon H. Snyder. The Biotin Switch Method for the Detection of S-Nitrosylated Proteins. Science’s stke.2015.
Biotin-HPDP，一個巰基反應性的生物素化試劑，是一種水不溶性的試劑，在加入反應性水溶液之前需要在合適的溶劑中溶解，包括二甲基亞砜（DMSO）和二甲基甲酰胺（DMF）。Biotin-HPDP由一個雙環(huán)生物素環(huán)結構，一個附著在生物素戊酸側鏈上的1,6-二氨基己烷和一個側鏈末端的巰基反應性基團共同組成。Biotin-HPDP末端的吡啶基二硫化物能夠與蛋白或其它分子上的游離巰基反應形成二硫鍵，并釋放吡啶-2-硫酮。Biotin-HPDP的長側鏈使得生物素標記的分子能夠更好的與親和素（avidin）或鏈霉親和素（streptavidin）探針結合。
參考文獻：Bioconjugate Techniques , 2nd ed.? By Greg T.Hermanson ?(Pierce Biotechnology, Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL). ?Academic Press ?(an imprint of Elsevier): ?London, Amsterdam, Burlington, San Diego . 2008. ISBN 978-0-12-370501-3.
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