背景及概述^[1][2]

賴氨酸加壓素亦稱“抗利尿激素”(antidiuretichormone，ADH)。一種9肽的激素，主要由下丘腦的視上核合成，然后送到垂體內(nèi)儲存起來。在機體需要時，釋放入血液中。其主要的生理作用是增加腎小管對水的重新吸收，減少水分從尿中排泄(故稱抗利尿激素)。當加壓素缺乏或腎小管對加壓素的反應(yīng)性降低時，每天尿量劇增，可多至15升，稱為尿崩癥?；颊叽罅颗拍?，極度口渴。在遠超過生理劑量時，能使小動脈和毛細血管普遍收縮，外周阻力增加，血壓上升。但在血壓的生理性調(diào)節(jié)中作用不大。近年來發(fā)現(xiàn)加壓素可以鞏固大白鼠的防御性條件反射，使它不易形成消退性抑制。故認為加壓素可能直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)高級部位的神經(jīng)元。

制備^[2]

賴氨酸加壓素的合成

1)微波促進合成載有還原型催產(chǎn)素及血管加壓素類多肽的樹脂

樹脂的溶脹：取Fmoc-RinkAmide-MBHAresin(取代量為0.5mmol/g)，將兩批各1.2g(0.6mmol)Fmoc-RinkAmide-MBHAresin經(jīng)25mLDCM溶脹30min，抽去DCM，再用25mLNMP溶脹30min，最后分別用NMP，DCM，NMP10mL沖洗干凈.微波促進脫除Fmoc保護基：將上述溶脹好的樹脂放入反應(yīng)器中，加入10mL含0.1mol•L－1HOBT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液，在微波反應(yīng)器中反應(yīng)1min，微波功率為15W，反應(yīng)溫度控制在45℃以內(nèi)，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻，反應(yīng)結(jié)束后濾去溶液；再加入10mL含0.1mol•L－1HOBT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液在微波反應(yīng)器中再反應(yīng)4min，微波功率為25W，反應(yīng)溫度控制在45℃以內(nèi)，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻.反應(yīng)結(jié)束后濾去溶液，用NMP洗滌干凈.得到脫去初始連接的Fmoc保護基的樹脂.微波促進Fmoc-Gly-RinkAmide-MBHAresin的合成：將Fmoc-Gly-OH(3.0mmol)，HBTU(3.0mmol)，HOBT(3.0mmol)和DIPEA(6.0mmol)溶于15mLNMP中，再將此溶液加入上面的樹脂中，在微波反應(yīng)器中反應(yīng)5min，微波功率為25W，反應(yīng)溫度控制在45℃以內(nèi)，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻.反應(yīng)結(jié)束后濾掉反應(yīng)液，用DCM和NMP各10mL洗滌樹脂3次.

肽鏈的延長：按照催產(chǎn)素和賴氨酸加壓素各自的序列，重復上述脫保護和偶合的步驟依次連接上相應(yīng)的氨基酸，偶合微波促進反應(yīng)時間5～20min不等.接完最后一個氨基酸后Fmoc保護基暫時不用脫除，各自得到連有還原型催產(chǎn)素和還原型賴氨酸加壓素兩種不同多肽的樹脂.

2）微波輔助I2氧化法固相形成二硫鍵

將上述得到的兩種不同的N端Fmoc未脫除的還原型樹脂各0.2mmol放入反應(yīng)器中，加入10mL溶有0.15gI2的苯甲醚/NMP(V/V＝1/50)溶液中，在微波反應(yīng)器中反應(yīng)10min，微波功率為10W，反應(yīng)溫度控制在45℃以內(nèi)，使用空氣壓縮機壓縮空氣，氣流冷卻.反應(yīng)結(jié)束后濾除反應(yīng)液，分別用四氯化碳，DMF，DCM將樹脂洗滌干凈，再按照上面脫除Fmoc保護基的方法脫去N端最后一個殘基連接的Fmoc保護基.

3）常溫下I2氧化法固相形成二硫鍵

將上述得到的兩種不同的N端Fmoc未脫除還原型樹脂各0.2mmol放入反應(yīng)器中，各加入10mL溶有0.15gI2的苯甲醚/NMP(1∶50，V/V)溶液中，在常溫下反應(yīng)2h.反應(yīng)結(jié)束后濾除反應(yīng)液，分別用四氯化碳，DMF，DCM將樹脂洗滌干凈，再按照上面脫除Fmoc保護基的方法脫去N端最后一個殘基連接的Fmoc保護基.

4）樹脂上多肽的裂解

將上述得到的兩種載有不同還原型多肽的樹脂、在微波促進條件下和常溫下條件氧化得到兩種載有不同環(huán)肽的樹脂各0.2mmol放入反應(yīng)瓶中，各加入裂解劑RegeantK[V(TFA)∶V(苯甲硫醚)∶V(水)∶V(苯酚)∶V(EDT)＝82.5∶5∶5∶5∶2.5]10mL，先在0℃下振搖30min，再在常溫下反應(yīng)1h.反應(yīng)結(jié)束后抽濾，加少量TFA和DCM洗滌3次，合并濾液.將濾液加入大量的冰乙醚中析出白色絮狀沉淀，冷凍離心得到相應(yīng)的粗品.

4）粗品的分析純化

粗將最后得到的還原型和氧化型多肽粗品溶于少量的水中，用島津制備型反相HPLC純化粗品.純化中采用C18反相制備柱(340mm×28mm)；流動相A：0.1%TFA/水(V/V)，流動相B：0.1%TFA/乙腈(V/V)；流動相梯度：流動相B20%～65%，40min；流速為5mL•min－1；檢測波長為214nm.收集的溶液凍干得還原型和氧化型多肽的純品.粗品的HPLC分析取少量不同固相環(huán)合條件下得到的氧化型多肽粗品，溶于乙腈/水中，用島津2010C型HPLC梯度洗脫分析.采用C18反相柱(150mm×4.6mm)；流動相A：0.1%TFA/水(V/V)，流動相B：0.1%TFA/乙腈(V/V)；流動相梯度：流動相B10%～50%，20min；流速為1mL•min－1；柱溫為40；℃檢測波長為214nm.

作用與用途^[3]

本品為合成加壓素，其作用同垂體后葉吸入劑。維持時間約4小時，對鼻黏膜刺激較少，對嚴重的尿崩癥病人療效不明顯。用于輕、中型尿崩癥的治療。

用量與用法^[3]

為噴霧劑：每次向鼻腔內(nèi)噴1～2下，每日3～5次。

不良反應(yīng)與注意事項^[3]

本品作用時間短，對嚴重病人療效較差。

劑型^[3]

噴霧劑：5mL(每毫升含50加壓單位)。

主要參考資料

[1] 心理咨詢大百科全書

[2] 微波促進催產(chǎn)素和賴氨酸加壓素環(huán)肽的固相合成

[3] 最新全科醫(yī)師用藥手冊