概述[1]
本試劑盒采用DNA吸附柱和獨(dú)特的溶液系統(tǒng)，適合于從多種來源的酵母培養(yǎng)物中快速簡單地提取基因組DNA。約3ml處于指數(shù)生長期的酵母培養(yǎng)液一般一次抽提可純化出10-15μg的高質(zhì)量的基因組DNA。純化DNA產(chǎn)物可直接用于PCR、酶切和雜交等實(shí)驗(yàn)。酵母細(xì)胞經(jīng)lyticase處理去除細(xì)胞壁后，獨(dú)特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
試劑盒組份[1]
緩沖液YB————————————20ml
結(jié)合液CB————————————11ml
漂洗液WB————————————15ml
抑制物去除液IR—————————25ml
洗脫緩沖液EB——————————15ml
Lyticase(10U/μl)———————2500U
蛋白酶K凍干粉(20mg/ml)—————20mg
吸附柱AC————————————50個
收集管(2ml)——————————50個
產(chǎn)品特點(diǎn)[1]
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3.快速，簡捷，單個樣品裂解后操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。
4.多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。
注意事項(xiàng)[1]
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2. 需要自備乙醇、異丙醇、β-巰基乙醇。
3. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到37℃和70℃?zhèn)溆谩?/p>
4. 結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5. 用戶需要自備Sorbitol buffer(1M 山梨醇，0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巰基乙醇)。
配制方法：在600 ml 去離子水里面溶解182.2 克山梨醇，加入200 ml 0.5M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要調(diào)節(jié)PH 值，定容到1L，4℃保存。臨用前加0.1%β-巰基乙醇(商品化的β-巰基乙醇摩爾濃度一般為14M)。
6. 菌體濃度檢測一般OD600 值為1 的時候,釀酒酵母細(xì)胞是1-2×10^7cells/ml，由于菌種和分光度計不同即使同樣細(xì)胞數(shù)量OD 值變化也很大，以上僅供參考。
7. 洗脫液EB 不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH 大于7.5， pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應(yīng)該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存，可以用TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。
主要參考資料
[1] 酵母基因組DNA快速提取試劑盒(柱式吸附)產(chǎn)品說明書