背景[1-3]
間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基是無血清、不含異源動物成分（Xeno-free）的人類干細胞培養(yǎng)基，可促進多種來源的人類干細胞的生長，如骨髓（BM-hMSC）、臍帶（UCM-hMSC）。干細胞培養(yǎng)基可促進人類干細胞的長期生長，同時還能保持多向分化潛能。干細胞培養(yǎng)基和干細胞無血清營養(yǎng)添加物共同使用，細胞貼壁及增值效果更好。
特點
1、無血清、不含異源動物成分；所有成分都是明確的，且同種來源（人），包括蛋白質(zhì)；不含抗生素；
2、能夠培養(yǎng)不同來源的人類間充質(zhì)干細胞；
3、維持人類干細胞的長期生長，保留類纖維原細胞形態(tài)；
4、極低的背景分化率；
5、維持干細胞的自我更新及多向分化潛能，可分化為骨細胞、脂肪細胞及軟骨細胞。
操作說明：
間充質(zhì)干（基質(zhì)）細胞無血清培養(yǎng)基的制備
1.在實驗開始一小時前，將無血清添加劑成分放置于2-8°C進行溶解。溶解完成后，輕輕搖晃試劑瓶使凍融的成分充分混合。
2.使用75%酒精消毒試劑盒中各瓶的開口外壁。
3.待試劑瓶上的酒精揮發(fā)干凈后，無菌打開各個試劑瓶。
4.將添加劑加入到間充質(zhì)干（基質(zhì)）細胞無血清基礎培養(yǎng)基中。
5.無菌吸取基礎培養(yǎng)基洗滌添加劑瓶，盡可能的將添加劑的所有成分完整的加入基礎培養(yǎng)基中。
6.重復步驟兩到三遍。
7.輕輕搖晃基礎培養(yǎng)基瓶子，使里面的各種成分充分混勻。將配制好的完全培養(yǎng)基放置于4℃保存。
應用[4][5]
用于骨髓間充質(zhì)干細胞移植聯(lián)合雌激素治療宮腔粘連的實驗研究
建立BMSCs體外分離、培養(yǎng)、擴增體系的基礎上,對BMSCs進行熒光標記。檢測BMSCs在體外一定培養(yǎng)條件下向子宮內(nèi)膜上皮細胞和／或間質(zhì)細胞分化的能力及其可能的機制。進一步建立新西蘭大白兔宮腔粘連動物模型,將體外擴增的兔BMSCs,標記后直接注射至雙側(cè)子宮肌壁間,觀察BMSCs在子宮組織的存活和遷移,觀察移植后子宮內(nèi)膜形態(tài)學的變化,檢測子宮組織和子宮內(nèi)膜腺上皮特異性標記物基因水平和蛋白表達的改變。
方法：1.在無菌條件下取出兔股骨和脛骨,采用全骨髓貼壁細胞分離法分離純化兔骨髓間充質(zhì)干細胞,用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSCs。待細胞鋪滿瓶底的80%以上,按照1：2～1：3傳代培養(yǎng)。
2. 采用流式細胞儀檢測細胞表面CD44、CD45和CD90的表達,進行鑒定。
3.采用PKH26對BMSCs進行熒光標記,檢測即時標記率,通過Annexin-V法檢測凋亡率、CCK-8法檢測BMSCs的增殖能力,繪制生長曲線,以明確PKH26標記對體外培養(yǎng)BMSCs生物學特性的影響；通過流式細胞儀檢測PKH26標記對兔BMSCs表面CD44、CD45和CD90表達的影響。
參考文獻
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[2]Ex vivo-expanded bone marrow stem cells home to the liver and ameliorate functional recovery in a mouse model of acute hepatic injury[J].Shi-Zhu Jin,Bing-Rong Liu,Jun Xu,Fu-Lai Gao,Zong-Jing Hu,Xin-Hong Wang,Feng-Hua Pei,Yu Hong,Hong-Yan Hu,Ming-Zi Han.Hepatobiliary&Pancreatic Diseases International.2012(1)
[3]Bone marrow and adipose stem cells can be tracked with PKH26 until post staining passage 6 in in vitro and in vivo[J].C.C.Ude,B.S.Shamsul,M.H.Ng,H.C.Chen,M.Y.Norhamdan,B.S.Aminuddin,B.H.I.Ruszymah.Tissue and Cell.2012(3)
[4]Use of Mesenchymal Stem Cells and Darbepoetin Improve Ischemia-Induced Acute Kidney Injury Outcomes[J].Altun,Bulent,Yilmaz,Rahmi,Aki,Tuncay,Akoglu,Hadim,Zeybek,Dilara,Piskinpasa,Serhan,Uckan,Duygu,Purali,Nuhan,Korkusuz,Petek,Turgan,Cetin.American Journal of Nephrology.2012(6)
[5]劉芳.骨髓間充質(zhì)干細胞移植聯(lián)合雌激素治療宮腔粘連的實驗研究[D].南方醫(yī)科大學,2013.