背景[1-3]
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。
肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。
肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（SEC）是肝臟內(nèi)所占比例最高的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，位于肝竇腔與肝細(xì)胞之間，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于擁有一般細(xì)胞所沒(méi)有的窗孔結(jié)構(gòu)、細(xì)胞間連結(jié)松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，從而達(dá)到快速交換各種大小分子的目的。
肝在遭到多種病原侵襲時(shí)，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞窗孔逐漸減少或消失，內(nèi)皮下基膜形成，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)，這一過(guò)程稱為肝竇毛細(xì)血管化。它由多種因素引起，其過(guò)程極復(fù)雜，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn)，近年來(lái)受到廣泛關(guān)注。
應(yīng)用[4][5]
用于Kupffer細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)肝臟造血及其機(jī)制研究
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞作為肝臟造血微環(huán)境的重要組成部分,可以通過(guò)Notch信號(hào)促進(jìn)肝臟LMS細(xì)胞的分化,且以T淋巴細(xì)胞分化占優(yōu)勢(shì)。這些發(fā)現(xiàn)為了解肝臟髓外造血及其意義提供了重要的見(jiàn)解,為肝臟駐留免疫細(xì)胞的發(fā)育分化及肝臟疾病{如肝炎、非酒精性脂肪肝(NAFLD)和肝細(xì)胞癌(HCC)}的治療等提供了一定的啟示。
研究方法:1.通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并比較了不同器官中肝臟造血干祖細(xì)胞(LSK和LMS)的比例。
2. 通過(guò)甲基纖維素半固體培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分析了肝臟造血干祖細(xì)胞的集落形成能力。
3. 采用多色流式細(xì)胞術(shù)分選肝臟或骨髓的造血干祖細(xì)胞,將CD45.2+小鼠的肝臟或骨髓造血干祖細(xì)胞與CD45.1+小鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞混合,通過(guò)尾靜脈注射到致死量照射的CD45.1+的小鼠體內(nèi),在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)受者小鼠外周血中CD45.2+細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及髓系細(xì)胞的比例,以確定成年肝臟造血干祖細(xì)胞的造血重建能力。
4. 通過(guò)LPS誘導(dǎo)的小鼠髓外造血模型來(lái)促進(jìn)成年肝臟造血。
5. 采用氯磷酸二鈉脂質(zhì)體清除巨噬細(xì)胞和Kupffer細(xì)胞,觀察清除Kupffer細(xì)胞之后對(duì)肝臟髓外造血的影響。
6. 通過(guò)ELISA方法檢測(cè)Kupffer細(xì)胞分泌的造血生長(zhǎng)因子及促炎因子的表達(dá)水平。
7. 采用共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)肝臟造血干祖細(xì)胞向淋巴細(xì)胞和髓系細(xì)胞分化的情況。
8. 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Kupffer細(xì)胞上ICAM-1和VCAM-1表達(dá)的變化及其相應(yīng)配體LFA-1和VLA-4在肝臟LSK上表達(dá)的情況。
9. 在Kupffer細(xì)胞與LSK細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入ICAM-1阻斷抗體,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)共培養(yǎng)體系中分化的淋巴細(xì)胞和髓系細(xì)胞的比例。
10. 通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)了肝臟微環(huán)境造血調(diào)節(jié)因子及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞上Notch配體基因水平的表達(dá)情況。
11. 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝臟LMS細(xì)胞上Notch受體Notchl及Notch2的表達(dá)情況。
12. 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了共培養(yǎng)體系中LMS細(xì)胞上Notch的活化形式NICD的表達(dá)情況。
13.在肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和LMS細(xì)胞共培養(yǎng)體系中加入Notch信號(hào)抑制劑,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)觀察肝臟LMS向淋巴細(xì)胞分化的情況。
參考文獻(xiàn)
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