A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞（A9 mouse subcutaneous connective tissue cells）是一種源自C3H/An品系小鼠皮下結(jié)締組織的成纖維樣貼壁細胞系，因其具有穩(wěn)定的遺傳背景和明確的代謝缺陷（如HPRT和APRT雙缺失），在遺傳學(xué)、毒理學(xué)及細胞生物學(xué)研究中被廣泛應(yīng)用。近年來，A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞更成為海洋生物毒素細胞毒性評估的重要體外模型。有研究利用A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞與人橫紋肌瘤細胞（A-673）比較了兩種常見致害水母，沙蜇（Nemopilema nomurai）和白色霞水母（Cyanea nozakii）的刺絲囊毒素的細胞毒性，為水母蜇傷的風險評估提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)^[1]。

態(tài)與特性

A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞呈典型的成纖維細胞樣，貼壁生長時呈長梭形或星形，單層排列可能呈漩渦狀。其具有較強的體外增殖能力，傳代至50代后仍能維持相對穩(wěn)定的特性。染色體核型為超二倍體（hyperdiploid），染色體數(shù)目在46到54條之間，以52條為主。存在多個標志染色體。該細胞在裸鼠體內(nèi)可致瘤，陽性。

科研應(yīng)用

因A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞的HPRT缺陷，A9細胞是構(gòu)建人-鼠雜交細胞株的經(jīng)典工具，用于人類染色體定位和基因圖譜研究。其HGPRT缺陷也使其廣泛用于基因突變篩選實驗，研究各種誘變劑的效果。另外A9細胞是外源基因轉(zhuǎn)染的理想宿主，用于研究基因表達和功能。提供定制的A-9-Cas9細胞系，可用于CRISPR文庫篩選和基因敲除。由于缺乏胸苷激酶（TK），無法利用外源胸苷，在含BrdU的培養(yǎng)基中存活率高，避免DNA摻入毒性，適于長期培養(yǎng)。在病毒學(xué)研究中，對偽狂犬病毒(PRV)、水皰性口炎病毒(VSV)和單純皰疹病毒(HSV)等敏感，是研究病毒復(fù)制、致病機制和抗病毒藥物的良好模型。

在細胞工程與免疫學(xué)中，可用于雜交瘤制備和單克隆抗體生產(chǎn)，也能用于細胞間通訊、輻射敏感性及嘧啶代謝通路等研究。并且可作為研究成纖維細胞功能和細胞外基質(zhì)（ECM）代謝的體外模型。

研究案例

在研究中，采用對數(shù)生長期的A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞，以4×103 cells/mL的密度接種，分別暴露于不同濃度（16.4~147.5 μg/mL）的沙蜇或白色霞水母刺絲囊毒素提取液，作用時間24~96 h，通過MTT法測定細胞存活率^[1]。結(jié)果顯示，兩種水母毒素對A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞的存活率均呈顯著的時間和劑量依賴性抑制。且白色霞水母毒素的細胞毒性顯著強于沙蜇。

優(yōu)A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞在毒理學(xué)研究中的優(yōu)勢

A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞之所以適用于此類毒性比較研究，主要得益于其以下特點：（1）來源于皮下結(jié)締組織，直接模擬水母蜇傷的首要靶組織。（2）體外培養(yǎng)條件成熟、增殖穩(wěn)定，便于開展大規(guī)模劑量-效應(yīng)實驗。（3）遺傳背景清晰（HPRT?/APRT?），可避免某些代謝干擾。（4）對多種毒素敏感，可重復(fù)性好。因此，A9小鼠皮下結(jié)締組織細胞不僅是水母毒素研究的常用工具，也可推廣至其他海洋生物毒素、環(huán)境污染物及藥物篩選的細胞毒性評價中^[1]。

參考文獻

[1] 徐金濤, 張學(xué)雷, 龐敏. 沙蜇和白色霞水母刺絲囊毒素的細胞毒性比較研究[J]. 海洋科學(xué)進展, 2014, 32(4): 543-550.