背景[1]
BAX抗體是以人工合成的Bax氨基端(Amino-terminal)的一段多肽為抗原制備而成的抗Bax單克隆抗體，是應(yīng)用最廣的Bax抗體?？贵w類型為Mouse IgG1。Bax抗體可以檢測內(nèi)源性水平的Bax，未發(fā)現(xiàn)和其它Bcl-2家族蛋白有交叉反應(yīng)。
Bax是一種促凋亡蛋白，上調(diào)Bax蛋白水平可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在通過線粒體應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中Bax起關(guān)鍵作用。
生理功能[2-3]
Bax可以形成寡聚體，然后從細(xì)胞漿中轉(zhuǎn)移到線粒體膜上；通過和線粒體膜上的一些pore proteins相互作用，增強(qiáng)線粒體的通透性(permeability)；最后導(dǎo)致細(xì)胞色素c釋放(cytochrome c release)、caspase-9激活以及后續(xù)的其它caspase激活和最終的細(xì)胞凋亡。Bax可以和Bcl-2形成多聚體，來調(diào)節(jié)線粒體膜的通透性，最終調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡或存活。BAX是與BCL-2同源的水溶性相關(guān)蛋白，是BCL-2基因家族中細(xì)胞凋亡促進(jìn)基因，BAX的過度表達(dá)可拮抗BCL-2的保護(hù)效應(yīng)而使細(xì)胞趨于死亡。目前多和BCL-2一起用于腫瘤的研究。Bax的表達(dá)更為廣泛，它可出現(xiàn)在肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、呼吸系上皮細(xì)胞和支氣管平滑肌、血管平滑肌細(xì)胞中。bax基因是人體最主要的凋亡基因，屬于bcl-2基因家族，編碼的Bax蛋白可與Bcl-2形成異二聚體，對Bcl-2產(chǎn)生阻抑作用。研究發(fā)現(xiàn)Bax/Bcl-2兩蛋白之間的比例關(guān)系是決定對細(xì)胞凋亡(Apoptosis)抑制作用強(qiáng)弱的關(guān)鍵因素，因此認(rèn)為，bax是極重要的促細(xì)胞凋亡(Apoptosis)基因之一。
應(yīng)用[4][5]
用于bcl-2和bax對肝癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控及肝癌凋亡相關(guān)單克隆抗體初步研究
建立乙醇誘導(dǎo)原發(fā)性肝細(xì)胞癌（簡稱肝癌）細(xì)胞凋亡模型的報道很少。bcl-2和bax分別是抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞凋亡基因，并且同屬于bcl-2基因家族。關(guān)于bcl-2和bax在肝癌的表達(dá)情況目前尚無定論。關(guān)于bax過表達(dá)對肝癌細(xì)胞凋亡的影響，以及bcl-2過表達(dá)對乙醇誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用尚未見報道。制備抗肝癌凋亡細(xì)胞的單克隆抗體（mAb）能夠探討細(xì)胞凋亡相關(guān)分子表達(dá)的變化和產(chǎn)生情況，并且可能用于細(xì)胞凋亡的檢測，是目前細(xì)胞凋亡研究中較新的探索性領(lǐng)域。
乙醇誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡及其Bax和Bcl-2的表達(dá)情況、轉(zhuǎn)染bcl-2和bax對肝癌細(xì)胞凋亡及其細(xì)胞周期蛋白p21WAF1/CIP1和p27Kip1表達(dá)的影響和抗乙醇誘導(dǎo)的肝癌凋亡細(xì)胞mAb的制備進(jìn)行以下幾個方面的工作：①用噻唑藍(lán)（MTT）法檢測濃度分別為20～100mL/L的乙醇作用6h對肝癌細(xì)胞系HCC-9204的殺傷作用。然后用60mL/L乙醇作用6h誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡，以臺盼藍(lán)染色、蘇木精-伊紅（HE）染色、May-Grunwald-Giemsa（MGG）染色、Hoechst 33258染色、吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）雙染色、透射電子顯微鏡觀察、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測和流式細(xì)胞儀分析不同細(xì)胞周期DNA含量等方法檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生情況。
用免疫細(xì)胞化學(xué)ABC法染色和圖像定量分析檢測誘導(dǎo)凋亡前后細(xì)胞的Bax和Bcl-2表達(dá)水平的變化。結(jié)果顯示，隨著乙醇濃度的增加，其對HCC-9204細(xì)胞的殺傷作用逐漸增強(qiáng)。60mL/L乙醇作用6h可使HCC-9204細(xì)胞發(fā)生明顯的凋亡形態(tài)學(xué)變化，并且大部分細(xì)胞為臺盼藍(lán)拒染和TUNEL陽性著色。流式細(xì)胞儀分析可見明顯的亞二倍體凋亡峰。誘導(dǎo)凋亡后的HCC-9204細(xì)胞Bax的表達(dá)水平明顯增高（P＜0.05），而Bcl-2在誘導(dǎo)凋亡前后均未見表達(dá)。②用免疫組織化學(xué)ABC法檢測Bcl-2和Bax在肝癌和正常肝組織的表達(dá)情況，并分析其與肝癌組織病理分級之間的關(guān)系。
參考文獻(xiàn)
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[5]楊連君.bcl-2和bax對肝癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控及肝癌凋亡相關(guān)單克隆抗體初步研究[D].第四軍醫(yī)大學(xué),2001.