背景[1-3]
人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA KIT應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)水平。用純化的人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入12羥二十烷四烯酸(12-HETE)，再與HRP標(biāo)記的12羥二十烷四烯酸(12-HETE)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的12羥二十烷四烯酸(12-HETE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)的濃度。
ELISA的基本原理是：
①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；
②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原（或抗體），而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
③測定時將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應(yīng)，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應(yīng)底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物，根據(jù)其顏色反應(yīng)的深淺進行定性或定量分析，以了解被測標(biāo)本中抗體或抗原含量。
應(yīng)用[4][5]
人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA KIT用于血漿12-HETE水平在預(yù)測ICU危重患者并發(fā)膿毒癥中的價值初探研究。
膿毒癥小鼠模型中血漿12-羥基二十碳四烯酸(12-HETE)的變化,了解重癥加強護理病房(ICU)危重患者血漿12-HETE水平;分析12-HETE與傳統(tǒng)生物標(biāo)志物及臨床危重癥評分之間的相關(guān)性;初步探討12-HETE在預(yù)測ICU危重患者并發(fā)膿毒癥中的臨床價值。方法:1.60只C57BL/6小鼠按照隨機數(shù)字表法分為對照組、LPS組和Feces組3組,每組20只。腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg制備LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠模型;對照組腹腔注射與其它組等量磷酸鹽緩沖液(PBS);Feces組腹腔注射小鼠糞便60mg/kg。給藥后連續(xù)觀察小鼠精神、活動狀況、呼吸頻率、進食飲水等情況,各組分別于制模6h、12h、24h、48h取血并處死小鼠;使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的方法來檢測血漿12-HETE水平。采集患者血液樣本并測定其血漿12-HETE水平,對照組血液樣本來自于健康體檢者,研究組患者在入住ICU后采集患者血液樣本,同時收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)研究對象的基線資料、生命體征、血常規(guī)、降鈣素原(PCT)、C反應(yīng)蛋白(CRP)等實驗檢查結(jié)果以及GCS、APACHEⅡ、SOFA等臨床評分系統(tǒng)的分值等臨床資料;觀察并記錄患者整個病程中膿毒癥的發(fā)生情況。使用統(tǒng)計學(xué)專業(yè)軟件對相關(guān)臨床資料進行了t檢驗、方差分析、c~2檢驗、Spearman相關(guān)性分析、繪制相關(guān)受試者工作特征曲線(ROC),評估12-HETE在預(yù)測膿毒癥發(fā)生中的臨床價值。
參考文獻
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[5]黃祺.血漿12-HETE水平在預(yù)測ICU危重患者并發(fā)膿毒癥中的價值初探[D].遵義醫(yī)科大學(xué),2019.