背景及概述^[1-2]

成纖維細(xì)胞(fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞(mesenchymalcell)分化而來(lái)。肺成纖維細(xì)胞(lungfibroblast，LF)是體內(nèi)外研究肺纖維化及其他肺部疾病的主要細(xì)胞，原代新生大鼠的肺成纖維細(xì)胞由于直接來(lái)源于機(jī)體組織，生物性狀尚未發(fā)生較大的變化，能較好反應(yīng)體內(nèi)的生長(zhǎng)特性，因此廣泛用于藥理、毒理、藥效試驗(yàn)。成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM是專門為正常人類成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)設(shè)計(jì)的最適于其生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，它是經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基，包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)和低濃度胎牛血清(2%)。該培養(yǎng)基緩沖體系為HEPES和重碳酸鹽，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中平衡后pH值為7.4，該培養(yǎng)基的配方能夠選擇性的促進(jìn)正常人類成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)中的增殖和生長(zhǎng)，并為其達(dá)到最理想營(yíng)養(yǎng)平衡狀態(tài)提供數(shù)量上和質(zhì)量上的保證。成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM包含500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基，10ml胎牛血清5ml成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)添加物和5ml青霉素/鏈霉素溶液。

存在問(wèn)題^[1]

目前，用于成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM存在的共同問(wèn)題：①白蛋白作為血清的主要成分，是無(wú)血清培養(yǎng)基中普遍的添加成分，由于牛血清白蛋白(BSA)為動(dòng)物源性蛋白，可能攜帶致病因子；目前的無(wú)動(dòng)物源性培養(yǎng)基多是采用重組白蛋白(HSA)替代BSA，導(dǎo)致培養(yǎng)基成本較高。②血清中含有多種貼壁因子，依賴血清的細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)時(shí)則不易貼壁，所以在無(wú)血清培養(yǎng)貼壁細(xì)胞時(shí)，需要提前包被貼壁因子，增加了操作的復(fù)雜性，而且常用的貼壁因子(如膠原、多聚賴氨酸、纖連蛋白、層粘連蛋白等)價(jià)格昂貴，提高了培養(yǎng)基成本。③多數(shù)無(wú)血清培養(yǎng)基的使用需給細(xì)胞一個(gè)適應(yīng)過(guò)程，逐步降低培養(yǎng)基中血清濃度，最終過(guò)渡到無(wú)血清培養(yǎng)；另外，在用于原代培養(yǎng)時(shí)，還需要額外添加2％的血清，使其不成為真正意義上的無(wú)血清培養(yǎng)。④無(wú)血清培養(yǎng)基傳代次數(shù)較少，例如，ATCC公司的FibroblastGrowthKitSerum-Free培養(yǎng)基在說(shuō)明書中明確指出，培養(yǎng)10代之后細(xì)胞增殖速率減緩。

制備^[2]

一種成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM，由以下成分及其濃度組成：DMEM/F1215.5g/L，重組白蛋白9.5g/L，檸檬酸鐵銨2.75mg/L，環(huán)庚三烯酚酮5.86μM，硫酸皮膚素0.83mg/L，卵磷脂10.5g/L，黃芪多糖6.85mg/L，胰島素11.63mg/L，地塞米松0.92μg/L，谷氨酰胺7.32mM，亞硒酸鈉5.86μg/L，維生素E13.2mg/L。制備方法：

(1)準(zhǔn)確稱取DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基干粉，重組白蛋白，檸檬酸鐵銨，環(huán)庚三烯酚酮，殼聚糖，硫酸皮膚素，卵磷脂，亞硒酸鈉和黃芪多糖，溶于43℃900mL超純水中，攪拌至均勻得溶液I；

(2)將溶液I冷卻至16℃后，加入胰島素，地塞米松和谷氨酰胺，攪拌均勻，用超純水定容至1L，得溶液II；

(3)將溶液II用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.2，得溶液III；

(4)將溶液III用0.2μm濾膜正壓過(guò)濾除菌，即得。

參考文獻(xiàn)

[1]成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FMFMFM使用說(shuō)明

[2]CN201611210539.5一種成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM及其制備方法