背景[1-3]
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞存在于淋巴組織中，是癌細(xì)胞的一種，可用于雜交瘤的建立。
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞來源于一位3歲的白人Burkitt淋巴瘤患者；EBV陰性；表達(dá)IL-4受體和低親和性IgE受體（CD23）；每個(gè)細(xì)胞表面大約有1500個(gè)IL-4的結(jié)合位點(diǎn)；分泌IgM（lamda L）；表達(dá)膜型和分泌型的免疫球蛋白。
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞
B細(xì)胞淋巴瘤是B細(xì)胞發(fā)生的實(shí)體腫瘤。包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。其分型眾多，經(jīng)典霍奇金淋巴瘤和結(jié)節(jié)性淋巴細(xì)胞為主型霍奇金淋巴瘤，現(xiàn)在被認(rèn)為是起源于B細(xì)胞的腫瘤。彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤（MALT）、小淋巴細(xì)胞淋巴瘤/慢性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）5種B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤最為常見，占非霍奇金淋巴瘤的3/4。B細(xì)胞淋巴瘤的預(yù)后和治療取決于淋巴瘤的具體類型以及分期分級。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
應(yīng)用[4][5]
用于鼠抗人GL50單克隆抗體的制備及其生物學(xué)功能的初步研究
備鼠抗人GL50分子的單克隆抗體并對其進(jìn)行相關(guān)生物學(xué)特性的鑒定；利用自主研制的GL50mAb，研究ICOS／GL50信號途徑在機(jī)體體液免疫應(yīng)答和腫瘤免疫中的生物學(xué)作用。
方法：（1）以天然高表達(dá)人GL50分子的B淋巴瘤Daudi細(xì)胞為免疫原免疫Balb／C小鼠；
（2）采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將免疫小鼠的脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2／0融合；
（3）以人GL50-L929、VK-L929轉(zhuǎn)基因細(xì)胞為目的單抗的篩選細(xì)胞，通過間接免疫熒光標(biāo)記法對雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行篩選；
（4）單抗標(biāo)記生物素，通過競爭抑制實(shí)驗(yàn)檢測單抗識別抗原位點(diǎn)的情況；
（5）采用常規(guī)方法制備染色體，分析雜交瘤細(xì)胞核型；
（6）采用免疫親和層析純化腹水型單抗；
（7）快速試紙鑒定單抗類型；
（8）采用間接免疫熒光標(biāo)記法測定單克隆抗體的效價(jià)，并檢測單抗在不同細(xì)胞株和細(xì)胞上的表達(dá)；
（9）Western-blotting實(shí)驗(yàn)檢測單抗與Daudi細(xì)胞和GL50-L929轉(zhuǎn)基因細(xì)胞GL50膜蛋白的結(jié)合能力；
（10）免疫組織化學(xué)檢測單抗對不同組織中GL50分子的識別能力；
（11）采用3H-TdR法，利用自行制備的GL50mAb并結(jié)合GL50-L929轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，研究ICOS／GL50信號途徑在活化T細(xì)胞體外增殖中的作用；
（12）采用ELISA法檢測GL50-L929和自行制備的GL50mAb對活化T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-2和IL-10的影響，并檢測ICOS-L929和GL50mAb對PWM介導(dǎo)的B細(xì)胞分泌抗體的生物學(xué)效應(yīng)。
參考文獻(xiàn)
[1]Non-Hodgkin Lymphoma:Diagnosis and Treatment[J].Stephen M.Ansell.Mayo Clinic Proceedings.2015(8)
[2]Methylation contributes to imbalance of PRDM1α/PRDM1bβexpression in diffuse large B-cell lymphoma[J].Yi-Wen Zhang,Jie Zhang,Jun Li,Jun-Feng Zhu,Yan-Li Yang,Li-Li Zhou,Zhong-Li Hu,Feng Zhang.Leukemia&Lymphoma.2015(8)
[3]An Oncogenic Role for Alternative NF-κB Signaling in DLBCL Revealed upon Deregulated BCL6 Expression[J].Baochun Zhang,Dinis Pedro Calado,Zhe Wang,Sebastian Fr?hler,Karl K?chert,Yu Qian,Sergei B.Koralov,Marc Schmidt-Supprian,Yoshiteru Sasaki,Christine Unitt,Scott Rodig,Wei Chen,Riccardo Dalla-Favera,Frederick W.Alt,Laura Pasqualucci,Klaus Rajewsky.Cell Reports.2015(5)
[4]PRDM1/BLIMP1:a tumor suppressor gene in B and T cell lymphomas[J].Michela Boi,Emanuele Zucca,Giorgio Inghirami,Francesco Bertoni.Leukemia&Lymphoma.2015(5)
[5]朱偉.鼠抗人GL50單克隆抗體的制備及其生物學(xué)功能的初步研究[D].蘇州大學(xué),2004.