背景[1-3]
BRADFORD蛋白定量試劑盒提供了一種簡單快速的方法，來測定樣品中的蛋白質濃度。
Bradford實驗原理：考馬斯亮藍G250,在游離狀態(tài)下呈紅色，光吸收在488nm；當它與蛋白質結合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質—色素結合物在595nm波長下有光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下1h內保持穩(wěn)定。該法試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質含量。
BRADFORD蛋白定量效果圖
Bradford蛋白質定量試劑盒特點：
1.節(jié)省時間—顯色反應迅速
2.兼容性好—不受大多數(shù)化學物質的影響。對于樣品中巰基乙醇和二硫蘇糖醇的兼容濃度，分別可達1mM和5mM。
3.良好的檢測范圍—檢測范圍為50-1000ug/ml。
考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的吸收峰的位置（Imax），由465nm變?yōu)?95nm，在一定的濃度范圍內，測定的吸光度值A595與蛋白質濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，樣品中巰基乙*醇的濃度可高達1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM，但受略高濃度的去垢劑影響，需確保SDS的濃度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測定試劑盒。
應用[4][5]
用于人骨形成蛋白-4和人骨形成蛋白-7在畢赤酵母中的共表達及其純化研究
骨形成蛋白（bone morphogenetic proteins，BMPs），通常也稱之為骨形態(tài)發(fā)生蛋白或骨生成素，是一類廣譜性的生長調節(jié)因子。已有的研究表明，BMPs的功能不僅僅局限于能誘導未分化的間充質細胞不可逆地轉化為軟骨和骨，BMPs還對組織器官的胚胎發(fā)生和形態(tài)形成起重要作用。
利用hBMP4和hBMP7的成熟肽cDNA片段制備轉基因酵母菌株，從而對hBMP4與hBMP7在畢赤酵母細胞共表達的實現(xiàn)和hBMP4／7異源二聚體的形成進行探討。BMP4與hBMP7在畢赤酵母細胞中共表達技術的建立：hBMP4與hBMP7的發(fā)酵工藝；蛋白純化工藝；抗原反應活性及理化性質的研究。搖瓶培養(yǎng)確定最適培養(yǎng)基為BMGY／BMMY；培養(yǎng)基的最適pH值為6.0；甲醇誘導濃度為1％；最適誘導周期為96小時。
經斑點印跡和蛋白質印跡證實了表達產物含有hBMP4與hBMP7，均具有良好的抗原性和特異性。
經還原性和非還原性SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳結合蛋白質印跡鑒定，所獲得的hBMP4與hBMP7為單體蛋白，分子量分別為26KD和17KD。
利用Bradford蛋白質定量法并結合Glyko BandScan量化軟件的分析發(fā)現(xiàn)，表達上清中hBMP4表達量達到33.34mg／L，占總蛋白含量的50.4％，hBMP7的表達量達到13.76mg／L，占總蛋白含量的20.8％。用陽離子交換層析法結合疏水柱層析法進行純化，最終純化得到的目的蛋白純度達到80％以上。
參考文獻
[1]Whole‐exome sequencing:a powerful technique for identifying novel genes of complex disorders[J].SSSanders.Clinical Genetics.2011(2)
[2]Disorders of dysregulated signal traffic through the RAS‐MAPK pathway:phenotypic spectrum and molecular mechanisms[J].MarcoTartaglia,Bruce D.Gelb.Annals of the New York Academy of Sciences.2010(1)
[3]Perinatal Exposure to Hazardous Air Pollutants and Autism Spectrum Disorders at Age 8[J].Amy E.Kalkbrenner,Julie L.Daniels,Jiu-Chiuan Chen,Charles Poole,Michael Emch,Joseph Morrissey.Epidemiology.2010(5)
[4]Immune Therapy in Autism:Historical Experience and Future Directions with Immunomodulatory Therapy[J].Michael G.Chez,Natalie Guido-Estrada.Neurotherapeutics.2010(3)
[5]陳雅娟.人骨形成蛋白-4和人骨形成蛋白-7在畢赤酵母中的共表達及其純化[D].福建師范大學,2004.