背景[1-3]
李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基可快速檢測(cè)食品和藥品中單增李斯特氏菌。陰性結(jié)果可在3天內(nèi)檢測(cè)完成。單增李斯特氏菌顯藍(lán)色，菌落周?chē)幸徊煌该鳝h(huán)。蛋白胨提供氮源和氨基酸，氯化鈉維持滲透壓，瓊脂是凝固劑，氯化鋰抑制革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)，抑菌劑抑制除李氏菌外的革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)。
李斯特菌屬(Listeria．spp)經(jīng)常存在于各種動(dòng)物和環(huán)境中，來(lái)源于土壤和水中的李斯特菌可能污染人類(lèi)消費(fèi)品，特別是即食食品。與其他常見(jiàn)致病菌相比，單核細(xì)胞增生李斯特菌的感染率雖然較低，但致死率高達(dá)20%～50%。因此，高效精確地從食品等樣品中分離和鑒別出單核細(xì)胞增生李斯特菌，對(duì)食品質(zhì)量控制和疾病預(yù)防治療有重要意義。
李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基
用法：稱(chēng)取基礎(chǔ)培養(yǎng)基14.2g加入180ml蒸餾水，加熱溶解并不停攪拌；另取1.2g李斯特氏菌添加劑，加入20ml無(wú)菌水，并加入一些玻璃球，不停振動(dòng)1-2min，使其混合均勻，將二者分別于121℃高壓滅菌15 min。冷至50℃左右時(shí)，把李斯特氏菌添加劑加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，并加入復(fù)溶后的李斯特氏菌抑菌劑1支，混勻，傾入無(wú)菌平皿。使培養(yǎng)基的厚度約為2-3mm，這樣有利觀(guān)察不透明環(huán)。
操作步驟：
使用前，把制備好的培養(yǎng)基放置室溫10-20分鐘。
1、按SN標(biāo)準(zhǔn)、GB標(biāo)準(zhǔn)、FDA標(biāo)準(zhǔn)、ISO標(biāo)準(zhǔn)或其它標(biāo)準(zhǔn)制備樣品液；
2、把樣品液加入李氏增菌肉湯(LB1、LB2)中增菌；或把樣品液和Half-Fraser增菌液按照1：10的比例混勻，30℃培養(yǎng)24小時(shí)；或其它增菌液中增菌培養(yǎng);
3、取一環(huán)增菌液劃線(xiàn)接種到李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上，36℃±1℃培養(yǎng)24-48小時(shí)。
應(yīng)用[4][5]
用于食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的毒力研究
收集熟肉制品、豆制品、奶及奶制品、蔬菜、水果、速凍食品、水產(chǎn)品、生肉等8類(lèi)食品共1645份樣品,進(jìn)行單增李斯特氏菌的分離與鑒定。
以單增李斯特氏菌相關(guān)毒力基因（hly、plcB、inlA、inlB、inlC、inlJ、prfA）設(shè)計(jì)引物,檢測(cè)49株單增李斯特氏菌食品分離株中的毒力基因攜帶率,并進(jìn)行小鼠毒力實(shí)驗(yàn),分析毒力基因攜帶率與單增李斯特氏菌毒力的相關(guān)性,建立PCR技術(shù)鑒別單增李斯特氏菌強(qiáng)毒株和弱毒株或無(wú)毒株的方法。
結(jié)果：?jiǎn)卧隼钏固厥暇目倷z出率為3.0%,總檢出率相比其他地區(qū)偏低。在8類(lèi)食品樣品中,生肉中單增李斯特氏菌的檢出率最高,為5.8%,其次是熟肉制品、水產(chǎn)品,檢出率分別為3.3%和2.9%。49株分離株中有19株7種毒力基因檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性,7株hly基因陰性,4株plcB基因陰性,4株prfA基因陰性。5株inlA、inlB基因陰性,13株inlC基因陰性,12株inlJ基因陰性,1株inlA、inlB、inlC、inlJ基因均為陰性。
4株分離株的毒力與標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC191161E相當(dāng),小鼠LD50在1.2×108-6.0×108CFU/mL之間,為強(qiáng)毒株。篩選出弱毒株09-132,LD50為1.7×1011CFU/mL。
結(jié)論：ALOA顯色培養(yǎng)基無(wú)論是從疑似菌檢出概率還是總的檢出率來(lái)說(shuō),都是的：PALCAM平板適于熟肉制品中單增李斯特氏菌檢測(cè)；為提高檢出率使用一種以上的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離。
參考文獻(xiàn)
[1]A New Perspective on Listeria monocytogenes Evolution[J].Marie Ragon,Thierry Wirth,Florian Hollandt,Rachel Lavenir,Marc Lecuit,Alban Le Monnier,Sylvain Brisse.PLOS Pathogens.2008(9)
[2]Molecular characteristics and virulence potential of Listeria monocytogenes isolates from Chinese food systems[J].Jianshun Chen,Xiaokai Luo,Lingli Jiang,Peijie Jin,Wei Wei,Dongyou Liu,Weihuan Fang.Food Microbiology.2008(1)
[3]Inhibition of ROCK activity allows InlF‐mediated invasion and increased virulence of Listeria monocytogenes[J].MarieluiseKirchner.Molecular Microbiology.2008(3)
[4]Internalins:a complex family of leucine-rich repeat-containing proteins in Listeria monocytogenes[J].H.Bierne,C.Sabet,N.Personnic,P.Cossart.Microbes and Infection.2007(10)
[5]于豐宇.食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的毒力研究[D].西南大學(xué),2011.