背景[1-3]
人腎小球系膜細胞分離自腎小球組織采用機械研磨法結(jié)合不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩過濾后使用膠原酶消化制備而來；細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
人腎小球系膜細胞又稱間充質(zhì)細胞、血管系膜細胞、球內(nèi)系膜細胞、毛細血管間細胞或深部內(nèi)皮細胞。腎小球系膜細胞是一種腎小球固有細胞，位于腎小球毛細血管袢之間，鄰接內(nèi)皮細胞或基底膜，形態(tài)不規(guī)則，細胞突起可深至內(nèi)皮細胞和基底膜之間，或經(jīng)內(nèi)皮細胞之間伸入毛細血管腔內(nèi)。腎小球系膜細胞具有分泌細胞基質(zhì)、產(chǎn)生細胞因子、支撐腎小球毛細血管叢、吞噬和清除大分子物質(zhì)以及類似平滑肌細胞收縮的功能。
人腎小球系膜細胞
腎小球系膜細胞呈星形，有多個突起，有豐富的細胞質(zhì)。位于腎小球的中軸區(qū)，分布于毛細血管簇中的毛細血管之間。主要功能包括維持腎小球毛細血管網(wǎng)結(jié)構(gòu)的完整性，調(diào)節(jié)腎小球濾過率，分泌多種細胞生長因子如轉(zhuǎn)化生長因子β、血小板源性生長因子以及腎素等生物活性物質(zhì)，從而發(fā)揮多種生物學功能。入球小動脈與出球小動脈在進出腎小球處與腎小球系膜細胞相連接，因此腎小球系膜細胞的收縮活動可增強小動脈的收縮作用，從而控制腎小球內(nèi)血液分流。
應(yīng)用[4][5]
用于黃芪甲苷對高糖誘導(dǎo)人腎小球系膜細胞損傷的保護作用及其機制研究
在體外，研究高糖誘導(dǎo)人腎小球系膜細胞（Human Mesangial Cell,HMC）損傷作用及黃芪甲苷（Astragalosides IV，As-IV）對其的保護作用，探討糖尿病腎?。―iabetic nephropathy,DN）發(fā)病機制與As-IV防治DN可能的作用機制，從而為As-IV的臨床應(yīng)用提供更多的理論依據(jù)。
方法：1.將HMC培養(yǎng)于含10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基中，置于5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。
2. 將常規(guī)培養(yǎng)的HMC隨機分為9組：正常糖組（NG，5.5mmol/L葡萄糖）；滲透壓對照組（NG+MA，5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇）；高糖組（HG，30mmol/L葡萄糖）；Tempol組（含100μmol/L Tempol高糖DMEM培養(yǎng)液）；
TGF-β阻斷劑SB431542組（含10μmol/L SB431542高糖DMEM培養(yǎng)液）；As-IV不同濃度干預(yù)組（分別為12.5，25，50，100μmol/LAs-IV高糖DMEM培養(yǎng)液）。
另設(shè)立正常糖組細胞，并用不同濃度（12.5，25，50，100μmol/L）As-IV進行干預(yù)。各組細胞孵育48h后，用倒置顯微鏡觀察HMC生長狀況，各組細胞增殖情況采用MTT比色法檢測。
根據(jù)檢測結(jié)果，選擇藥物作用劑量，并排除滲透壓對細胞的影響。
3.根據(jù)MTT的檢測結(jié)果，將常規(guī)培養(yǎng)的HMC隨機分為7組：正常組（NG），高糖組（HG）,Tempol組（100μmol/L），SB431542組（10μmol/L SB431542），As-IV低，中，高劑量組（25，50，100μmol/LAs-IV）。各干預(yù)因素處理48h后，采用酶聯(lián)免疫吸附劑測定（Enzyme-linked immunosorbent assaym,ELISA）法檢測各組細胞上清液中IV型膠原（collagen typeⅣ，ColⅣ）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9，MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1（tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1，TIMP-1）的含量。
參考文獻
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[5]熊莉.黃芪甲苷對高糖誘導(dǎo)人腎小球系膜細胞損傷的保護作用及其機制研究[D].安徽醫(yī)科大學,2014.