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L-瓜氨酸的制備

2020/10/23 9:04:34

背景及概述[1][2]

瓜氨酸是一種最初發(fā)現(xiàn)于西瓜汁,但不存在于蛋白質(zhì)中的L-α-氨基酸。是動(dòng)物體內(nèi)氨基酸代謝尿素循環(huán)的中間產(chǎn)物。 L-瓜氨酸(L-Citrulline)是一種非蛋白氨基酸,為無色柱狀結(jié)晶,能溶于水,不溶于甲醇和乙醇。瓜氨酸最初是從西瓜中提 取而來,所以命名為瓜氨酸。學(xué)名2-氯基-5-脲基戊酸或5-脲基鳥氨酸,從甲醇水溶液中得到的結(jié)晶為棱柱體。

易溶于水,不溶于甲醇、乙醇和乙醚。能被磷鎢酸從其濃溶液中沈淀出來,與濃堿溶液作用生成鳥氨酸、二氧化碳和氨。其銅鹽為藍(lán)色棱柱晶體,熔點(diǎn)257-258℃。其氫氧化物的熔點(diǎn)185℃ (分解),在水中[α]D22為+17.9°。存在于西瓜等瓜中。人體中,瓜氨酸是一種非蛋白質(zhì)氨基酸,不參與蛋白質(zhì)的合成,但具有肽鍵形成能力,過去認(rèn)為其只存在于鳥氨酸-尿素循環(huán)的中間產(chǎn)物。

在葫蘆科植物的種子中瓜氨酸以游離態(tài)存在,迄今為止,人們已經(jīng)成功地從西瓜等植物榨汁中分離得到了瓜氨酸,但其在現(xiàn)有腸外營(yíng)養(yǎng)液配方中暫時(shí)無法直接提供。很長(zhǎng)時(shí)間,大家對(duì)瓜氨酸的認(rèn)識(shí)停留在“垃圾”氨基酸上,但最近的大量研究表明,瓜氨酸與多種疾病存在密切聯(lián)系。

瓜氨酸主要是通過腸上皮細(xì)胞的谷氨酸-鳥氨酸途徑合成,從谷氨酰胺代謝而來。瓜氨酸為鳥氨酸循環(huán)的中間代謝產(chǎn)物,不能被肝臟直接從門靜脈中攝取,使精氨酸不被肝臟代謝,瓜氨酸在此過程中雖不斷被產(chǎn)生和利用,某些情況下瓜氨酸雖可以被消耗,但相關(guān)實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)其對(duì)血漿瓜氨酸水平并無顯著性影響,故此,一般認(rèn)為肝臟功能對(duì)血漿瓜氨酸水平幾乎無影響。

瓜氨酸的代謝主要經(jīng)腎臟的腎近曲小管的精氨琥珀酸合成酶及裂解酶作用下生成精氨酸,釋放入血,當(dāng)腎小球?yàn)V過率大于50ml/min 時(shí),瓜氨酸可在體內(nèi)蓄積,而在老年患者中,可因其腎功能減退,血漿瓜氨酸水平升高,故對(duì)于老年患者的血漿瓜氨酸正常水平值可適當(dāng)放寬。

用途[3]

L-瓜氨酸具有很多重要的生理功能如清除自由基、異體排斥效 應(yīng)指示劑、血管舒張作用、穩(wěn)定血壓以及診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、抗氧化等;此外,它還有著非 常顯著的恢復(fù)精力和提高人體免疫力的作用。近年來L-瓜氨酸在食品、化妝品和藥物等領(lǐng)域 越來越來受到重視,具有廣泛的開發(fā)應(yīng)用前景。

提取[3]

一種利用反膠團(tuán)萃取體系分離純化L-瓜氨酸的方法,包括以下步驟:

1)將L-瓜氨酸發(fā)酵液離心去除雜質(zhì),制得離心液;在0.2~0.8MPa壓力下,采用截留 分子量為800~1200Dal的超濾膜將離心液過濾,用鹽酸調(diào)濾出液的pH值為2.0~5.0,然后加 入無機(jī)鹽調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度為0.10~0.30mol/L,制得含有L-瓜氨酸的溶液;該步驟中離心可以去除菌體等雜質(zhì),超濾膜過濾可除去色素、蛋白、多糖等大分子雜質(zhì)。

2)在20~30℃下,將表面活性劑加入到有機(jī)溶劑中,配制表面活性劑濃度為50~ 70mmol/L的溶液,混合均勻,制得反膠團(tuán)體系溶液;取去離子水、氫氧化鈉和無機(jī)鹽配制pH值為8.0~11.0、離子強(qiáng)度為1.0~2.0mol/L的 無機(jī)鹽水溶液,制得反萃取水相溶液;

3)將步驟(1)制得的含有L-瓜氨酸的溶液加入到步驟(2)制得的反膠團(tuán)體系溶液 中,反膠團(tuán)體系溶液體積與含有L-瓜氨酸的溶液的體積比為1:(1~10),振蕩5~15min混 合均勻,萃取操作溫度為15~30℃。在2000~3000r/min下離心3~6min進(jìn)行分相,取有 機(jī)相,制得含有L-瓜氨酸的反膠團(tuán)有機(jī)溶液;

該步驟萃取過程中L-瓜氨酸進(jìn)入到有機(jī)相溶液中的反膠團(tuán)內(nèi)部。

4)向步驟(3)制得的含有L-瓜氨酸的反膠團(tuán)溶液中加入步驟(2)制得的反萃取水 相溶液中,含有L-瓜氨酸的反膠團(tuán)溶液與反萃取水相溶液的體積比為(1~10):1,振蕩5~ 30min混合均勻,萃取操作溫度為20~35℃,在2000~3000r/min下離心3~6min進(jìn)行分相, 制得含有L-瓜氨酸的水溶液;

該步驟萃取過程中L-瓜氨酸由有機(jī)相溶液中的反膠團(tuán)內(nèi)部進(jìn)入到水相溶液中。

5)將步驟(4)制得的L-瓜氨酸的水溶液在0.2~0.8MPa壓力下,經(jīng)截留分子量為300~ 400Dal的納米濾膜過濾,用鹽酸調(diào)節(jié)濾出液的pH值為5.9~6.0,冷卻至0~5℃結(jié)晶,離 心分離結(jié)晶,60℃下真空干燥,制得L-瓜氨酸。

該步驟通過納米濾膜將殘留的表面活性劑去除,制得的L-瓜氨酸為白色粉末狀產(chǎn)品。

主要參考資料

[1] 有機(jī)化合物辭典

[2]戴芳萍,王箴,李倩.瓜氨酸與臨床相關(guān)疾病的研究進(jìn)展[J].沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,18(05):385-387+391.

[3]  董永勝.一種分離純化L-瓜氨酸的方法. CN201310099775.4 ,申請(qǐng)日20130326

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