背景[1-3]
人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測(cè)樣本中人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)的含量。
原理：用抗人PCNA單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的PCNA與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人PCNA，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，PCNA濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求出標(biāo)本中PCNA濃度。
人抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒
檢測(cè)程序：
1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。
3.每孔中加入抗體工作液10 0ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃6 0分鐘。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃3 0分鐘。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8.每孔加入100ul終止液混勻。
9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在45 0 nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 mU/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
3.根據(jù)樣品OD值在該曲線(xiàn)圖上查出相應(yīng)PCNA含量即可。
應(yīng)用[4][5]
用于薯蕷皂苷元對(duì)Ad-TSHR-289誘導(dǎo)Graves病模型小鼠甲狀腺細(xì)胞增殖及免疫功能的影響研究
通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來(lái)研究Dio對(duì)GD的治療作用。
1. 評(píng)價(jià)Dio對(duì)Ad-TSHR-289誘導(dǎo)GD模型小鼠甲狀腺腫大的治療作用；從抑制細(xì)胞增殖的角度,初步探討其分子生物機(jī)制。
2. 研究Dio對(duì)Ad-TSHR-289誘導(dǎo)GD模型小鼠免疫功能的影響。
方法：1.動(dòng)物模型構(gòu)建及藥物干預(yù)具體分組如下：正常對(duì)照組,正常小鼠高劑量Dio干預(yù)組（100mg·kg-1·day-1）,陰性病毒對(duì)照組,GD模型組,GD模型低劑量Dio治療組,GD模型高劑量Dio治療組。
應(yīng)用重組腺病毒Ad-TSHR-289,肌肉注射免疫雌性BALB/c小鼠,每隔3周注射一次,共3次,制備GD動(dòng)物模型。成模后的小鼠分別給予高、低劑量的Dio治療。Dio治療12和24天后,分兩批次處死小鼠,留取血清、甲狀腺、脾臟標(biāo)本。
3. Dio治療過(guò)程中毒副作用的初步評(píng)估處死稱(chēng)量前體重,采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中的谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、肌酐（Cr）。
4. Dio對(duì)GD模型小鼠甲狀腺腫大治療作用評(píng)價(jià)采用放射免疫法和電化學(xué)發(fā)光法測(cè)TT4和TRAb變化；Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件測(cè)量甲狀腺大??；H&E染色及電子顯微鏡觀察甲狀腺組織及超微結(jié)構(gòu)變化。
4.Dio抑制甲狀腺細(xì)胞增殖相關(guān)機(jī)制研究采用BrdU摻入實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠甲狀腺組織中增殖細(xì)胞的變化；免疫組化檢測(cè)Dio干預(yù)后小鼠甲狀腺組織中IGF-1、NF-κB、cyclin D1、PCNA蛋白水平的變化；Real-time PCR檢測(cè)Dio干預(yù)后小鼠甲狀腺組織中IGF-1、cyclin D1、PCNAmRNA水平的變化。
參考文獻(xiàn)
[1]Activation of nuclear factor-κB contributes to growth and aggressiveness of papillary thyroid carcinoma[J].Jung-Soo Pyo,Guhyun Kang,Dong Hoon Kim,Seoung Wan Chae,Chanheun Park,Kyungeun Kim,Sung-Im Do,Hyun Joo Lee,Joo Heon Kim,Jin Hee Sohn.Pathology-Research and Practice.2013(4)
[2]A 2011 Survey of Clinical Practice Patterns in the Management of Graves?Disease[J].Henry B.Burch,Kenneth D.Burman,David S.Cooper.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.2012(12)
[3]Anti-tumour and immunomodulating activities of diosgenin,a naturally occurring steroidal saponin[J].Zhongmei He,Yudan Tian,Xiantao Zhang,Bai Bing,Lianxue Zhang,Huaisheng Wang,Wenjie Zhao.Natural Product Research.2012(23)
[4]Beneficial role of diosgenin on oxidative stress in aorta of streptozotocin induced diabetic rats[J].Leelavinothan Pari,Pandurangan Monisha,Abdul Mohamed Jalaludeen.European Journal of Pharmacology.2012(1-3)
[5]蔡鵠.薯蕷皂苷元對(duì)Ad-TSHR-289誘導(dǎo)Graves病模型小鼠甲狀腺細(xì)胞增殖及免疫功能的影響[D].山東大學(xué),2013.