背景[1-3]
Β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體是一類可以特異性結(jié)合Β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1的多克隆抗體，主要用于Β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1的體外免疫學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
Β淀粉樣蛋白前體蛋白指由定位于21號(hào)染色體長(zhǎng)臂上的基因編碼合成的一類蛋白質(zhì)肽鏈，因其水解斷裂后，可產(chǎn)生一種由40～42個(gè)氨基酸組成的稱為淀粉樣蛋白的肽鏈，所以被稱為淀粉樣蛋白前體，簡(jiǎn)稱為APP。APP存在于身體的多種組織中，由于組成肽鏈的氨基酸數(shù)目不同，已發(fā)現(xiàn)至少有3種不同的APP，大腦中存在較多的是APP695。APP合成后隨軸漿流轉(zhuǎn)運(yùn)，多分布在突觸處。肽鏈的大部分在細(xì)胞外，為氨基端，細(xì)胞內(nèi)留有較短的羧基端。
Β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白1
β淀粉樣蛋白(amyloid-β，Aβ)是由淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein，APP)經(jīng)β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而產(chǎn)生的含有39～43個(gè)氨基酸的多肽。它可由多種細(xì)胞產(chǎn)生，循環(huán)于血液、腦脊液和腦間質(zhì)液中，大多與伴侶蛋白分子結(jié)合，少數(shù)以游離狀態(tài)存在。人體內(nèi)Aβ最常見(jiàn)的亞型是Aβ1～40和Aβ1～42。在人腦脊液和血中，Aβ1～40分別比Aβ1～42的含量水平高10倍和1．5倍，Aβ1～42具有更強(qiáng)的毒性，且更容易聚集，從而形成Aβ沉淀的核心，引發(fā)神經(jīng)毒性作用。
Aβ是由APP經(jīng)β-和γ-分泌酶水解產(chǎn)生的。APP是一種在各種組織中廣泛存在，并集中表達(dá)于神經(jīng)元突觸部位的膜蛋白質(zhì)，Aβ片段即位于其跨膜區(qū)域。β-分泌酶首先在β位點(diǎn)將APP裂解為β-N端片段(sAPPβ)和β-C端片段，然后γ-分泌酶在β-C端片段的近N端跨膜區(qū)域水解釋放出有39～43個(gè)氨基酸組成的Aβ肽段，此過(guò)程被稱為APP的淀粉樣降解途徑，APP的非淀粉樣降解途徑是由α-和γ-分泌酶所介導(dǎo)水解生成。sAPPα、p3和α-C端片段，由于α-分泌酶的作用位點(diǎn)在Aβ區(qū)域，從而阻止了Aβ的產(chǎn)生。
Aβ的生成效率主要取決于APP及其水解酶的亞細(xì)胞定位。在穩(wěn)定狀態(tài)下，α-分泌酶主要分布在細(xì)胞膜上，β-分泌酶則主要定位于高爾基體外側(cè)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)(tans-Golgi network，TGN)和內(nèi)涵體中，γ-分泌酶的分布較廣，在細(xì)胞膜和多種細(xì)胞器中均有發(fā)現(xiàn)。
應(yīng)用[4][5]
用于T細(xì)胞在AD模型鼠中對(duì)海馬神經(jīng)元凋亡和再生的影響及機(jī)制分析研究
為探究T細(xì)胞在阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s Disease,AD）發(fā)病機(jī)理中對(duì)腦海馬神經(jīng)元凋亡和再生的影響及其分子機(jī)制。
1. 建立模擬AD的BALB/c小鼠動(dòng)物模型。包括免疫功能正常的模擬AD小鼠動(dòng)物模型和T細(xì)胞免疫缺陷的模擬AD小鼠動(dòng)物模型,并對(duì)這種新建立的動(dòng)物模型進(jìn)行病理學(xué)評(píng)價(jià)。
2. 利用所建立模擬AD的BALB/c小鼠動(dòng)物模型,探討T淋巴細(xì)胞在AD模型鼠中對(duì)小鼠腦海馬神經(jīng)元凋亡和再生的影響作用。
3. 應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù),探究在AD模型鼠中T細(xì)胞對(duì)海馬神經(jīng)元凋亡和再生影響的可能分子機(jī)制。
方法：1.選取BALB/c正常小鼠（BALB/c-WT）和T細(xì)胞缺陷的BALB/c裸小鼠（BALB/c-nude）各24只,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。利用顯微注射方法分別在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射寡聚態(tài)Aβ1-42和生理鹽水（NS）。實(shí)驗(yàn)組又分為兩組,即實(shí)驗(yàn)I組（BALB/c-WT+Ap1-42）和實(shí)驗(yàn)II組（BALB/c-nude+Ap1-42）,對(duì)照組也分對(duì)照I組（BALB/c-WT+NS）和對(duì)照II組（BALB/c-nude+NS）,每組12只,4組共48只。建立模擬AD的BALB/c小鼠動(dòng)物模型。于造模后的第7d、21d二個(gè)時(shí)間點(diǎn)分批次分別取各組模型鼠的腦組織和外周血。
2. HE染色,在光鏡下觀察并比較實(shí)驗(yàn)組（Aβ1-42-injection）與對(duì)照組（NS-injection）注射部位的腦組織及周圍的炎癥反應(yīng)情況；免疫組織化學(xué)顯色檢測(cè)Aβ1-42在實(shí)驗(yàn)組小鼠腦內(nèi)沉積表現(xiàn)。
3. 利用免疫組織化學(xué)方法,于造模21d時(shí),分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)與凋亡相關(guān)基因Bcl-2和Bax的表達(dá)情況；用TUNEL法進(jìn)一步檢測(cè)各組小鼠海馬神經(jīng)元發(fā)生凋亡的情況。
4. 采用同樣方法,于造模7d時(shí),用微管結(jié)合蛋白（Doublecortin,DCX）抗體特異性標(biāo)記海馬齒狀回增殖的神經(jīng)前體細(xì)胞,分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠腦海馬神經(jīng)前體細(xì)胞再生的情況。
5. 用熒光定量RT-PCR方法,分別檢測(cè)并比較造模后的第7d和21d實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠外周血中的IL-2、IFN-γ的基因表達(dá)和腦組織IL-1β和TNF-α的基因表達(dá)情況。
6.應(yīng)用Image pro-plus6.0圖像分析系統(tǒng)軟件,分別將各組測(cè)量所得的DCX、Bcl-2、Bax和TUNEL法標(biāo)記的陽(yáng)性產(chǎn)物平均光密度值,應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件,將數(shù)據(jù)分別進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA）,進(jìn)行組間多重比較；將熒光定量RT-PCR檢測(cè)所得的基因表達(dá)數(shù)據(jù)作重復(fù)測(cè)量方差分析,不同時(shí)間兩組比較用t檢驗(yàn)；均以P<0.05,認(rèn)為結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
參考文獻(xiàn)
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