背景^[1][2]

單克隆抗體技術起源于Kohler等創(chuàng)建的體外鼠源雜交瘤技術。經多年研究，鼠單抗已從單純的生物實驗室科研及臨床診斷發(fā)展到治療性抗體藥物。但鼠單抗的主要缺陷是小鼠免疫系統(tǒng)不能識別某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠單抗的親和性不如兔來源抗體的親和性高。

然而由于沒有發(fā)現兔源性的漿細胞瘤及病毒體外轉染兔B細胞的技術困難，直到1995年在c-myc/v-abl轉基因兔身上成功地獲得了兔漿細胞瘤細胞系，得到了穩(wěn)定的兔-兔雜交瘤，才使兔單克隆抗體技術有了突破性進展。近年兔單克隆抗體技術日臻完善，目前商品化的兔單抗已達數千種。

14-3-3 蛋白在腦組織表達十分豐富，14-3-3gamma 蛋白主要在神經元中表達，它與許多蛋白結合，在細胞凋亡、生長、增殖的信號轉導過程中發(fā)揮關鍵的調節(jié)作用，是細胞內重要的保護性蛋白，但14-3-3 蛋白在缺血性神經元中的作用還不清楚。實驗結果顯示14-3-3gamma 在局灶性腦缺血海馬及大腦皮質的缺血周圍區(qū)呈高表達，可見核表達。

推測14-3-3gamma 表達上調及入核可能激活轉錄，從而影響凋亡，發(fā)揮其細胞保護作用。14-3-3gamma 在缺血的神經元原代培養(yǎng)細胞中表達上調，通過結合Bad 滯留在細胞質中，從而阻止Bad 與Bcl2 /xl結合以及Bax 釋放，達到抑制凋亡作用。

最近有研究表明，14-3-3Tau 亞型能夠調節(jié)Beclin1 并參與了自噬過程。自噬是一個由溶酶體清除、降解細胞內蛋白及細胞器的過程，自噬在缺血損傷中具有作用，但是否14-3-3gamma 參與自噬過程，還有待進一步研究。14-3-3gamma兔單克隆抗體可用于分子印跡分析及 流式細胞儀等。注意14-3-3gamma兔單克隆抗體不適用于ICC/IF，IHC-P 或 IP。

應用

1. 在生物標記物開發(fā)中的應用

兔單克隆抗體包括14-3-3gamma兔單克隆抗體廣泛用于生命科學研究的各個領域，尤其在免疫組織化學以及檢測蛋白的轉譯后修飾方面具有獨特優(yōu)勢。至今已有100多種兔單克隆抗體開發(fā)用于癌癥的IHC臨床診斷與研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC診斷試劑盒。在蛋白修飾研究領域，如蛋白的磷酸化，在與疾病相關的蛋白質信號通路中起到了至關重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔單克隆抗體可以非常清楚地顯示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多種磷酸化特異性的兔單克隆抗體面世。

2. 在治療抗體藥物開發(fā)中的應用

臨床使用的大多數治療用抗體均需經體外親和力成熟這一步驟，以提高抗體的親和力。這一過程常需8至12個月，最終親和力在納摩爾級(10-9 mol/L)。兔單抗不需使用體外親和力成熟，就能達到10-11至10-13 mol/L。這種高親和力不僅減少抗體的臨床使用量，還能減少由于使用大量抗體帶來的副作用。但這種高親和力的優(yōu)勢還需在動物和臨床試驗中進一步證實。另外，與鼠單抗的人源化相比，

兔單克隆抗體的人源化更容易。因為，兔單克隆抗體主要由一種重鏈及輕鏈基因構成，通過分析大量的兔單克隆抗體序列發(fā)現，兔與人的抗體同源性更高，約60%～76%，而小鼠與人的抗體同源性略低，為57%～72%，說明用兔單克隆抗體開發(fā)藥物前景更廣闊。

主要參考資料

[1] 李婷婷，崔慧斐. 兔單克隆抗體的發(fā)展及應用前景[J]. 食品與藥品，2012，14(9)： 373-376.

[2] 孫紹騫, 于春艷, 劉玉和. 大鼠大腦局部腦缺血周圍區(qū)海馬及大腦皮質 CLIC4 及 14-3-3gamma 蛋白的表達及其意義[J]. 中國老年學雜志, 2012, 1: 048.