背景[1-3]
小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)含量。
實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)水平。用純化的小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)，再與HRP標(biāo)記的小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)濃度。
小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒
樣本處理要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
應(yīng)用[4][5]
用于硫化氫對(duì)大鼠急性肺損傷白介素-4及巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2表達(dá)的影響研究
探討硫化氫（H2S）對(duì)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷（acute lung injury,ALI）中白介素-4（interleukin-4,IL-4）和巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2（macrophage inflammatory protein-2,MIP-2）表達(dá)的影響,以及H2S對(duì)ALI是否具有保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
方法：健康雄性SD大鼠27只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組,ALI組和NaHS干預(yù)組,每組9只。（1）正常對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水0.5ml,10分鐘后尾靜脈注射生理鹽水（2ml/kg）;（2）ALI組：腹腔注射生理鹽水0.5ml,10分鐘后尾靜脈注射LPS（5mg/kg）制造大鼠ALI模型；（3）NaHS干預(yù)組：腹腔注射NaHS（28μmol/kg）,10分鐘后尾靜脈注射LPS（5mg/kg）。觀察各組大鼠活動(dòng)、精神情況、發(fā)紺等一般狀態(tài)的變化,在各組尾靜脈注射6小時(shí)后將大鼠處死,留取大鼠肺泡灌洗液和肺組織標(biāo)本。肉眼觀察各組肺組織大致改變,取右上肺用福爾馬林固定、石臘包埋切片行HE染色,光鏡下觀察肺組織的病理變化；解剖頸部暴露氣管行插管灌洗,每次4℃生理鹽2mL重復(fù)灌洗3次,用單層紗布過濾,離心后行細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù),酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）肺泡灌洗中IL-4及MIP-2的濃度。
結(jié)果：1.肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)的變化：正常對(duì)照組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)為2.16±0.36（×109/L）;ALI組大鼠BALF的細(xì)胞總數(shù)為13.524±2.73（×109m）兩組比較,ALI組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)顯著升高（P<0.05）；NaHS干預(yù)組BALF中細(xì)胞總數(shù)為9.92±1.93（×109/L）,低于ALI組,但仍高于正常對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
2. 肺泡灌洗液中IL-4的變化：正常對(duì)照組大鼠BALF中IL-4濃度為5.28±0.32pg/ml;ALI組BAL中IL-4的濃度是5.99±0.63pg/ml,與正常對(duì)照組比較顯著增加（P<0.05）；NaHS干預(yù)組BALF中IL-4為6.62±0.59pg/ml,較正常對(duì)照組與ALI組均升高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
3. 肺泡灌洗液中MIP-2的變化：正常對(duì)照組大鼠BALF中MIP-2的濃度是1.66±0.18pg/ml,ALI組BALF中MIP-2的濃度為2.99±0.79pg/ml,與正常對(duì)照組比較顯著增加（P<0.01）；NaHS干預(yù)組BALF中MIP-2的濃度為2.14±0.19pg/ml,較ALI組低,但仍高于正常對(duì)照,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
結(jié)論：1.在脂多糖誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷肺泡灌洗液中IL-4及MIP-2表達(dá)增高；2.硫化氫干預(yù)后,IL-4在急性肺損傷中的表達(dá)增加,MIP-2在急性肺損傷中的表達(dá)減少；3.硫化氫對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷可能通過促進(jìn)IL-4表達(dá)與抑制MIP-2的表達(dá)起保護(hù)作用。
參考文獻(xiàn)
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