背景[1-3]
大鼠組織因子(TF)ELISA試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中大鼠組織因子(TF)的含量。
大鼠組織因子(TF)檢測(cè)試劑盒測(cè)定原理：
該試劑盒基于ELISA檢測(cè)方法。該試劑盒中提供的微量滴定板已用組織因子(TF)預(yù)涂。在反應(yīng)過程中，樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的組織因子(TF)與組織因子(TF)特異性生物素化檢測(cè)抗體上固定相載體上固定量的組織因子(TF)競(jìng)爭(zhēng)。從板中洗滌過量的綴合物和未結(jié)合的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，并將HRP-鏈霉親和素（SABC）加入每個(gè)微孔板并孵育。然后將TMB底物溶液加入每個(gè)孔中。通過加入硫酸溶液終止酶-底物反應(yīng)，并在450nm的波長(zhǎng)下用分光光度法測(cè)定顏色變化。然后通過將樣品的O D與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較來確定樣品中組織因子(TF)的濃度。
大鼠組織因子(TF)ELISA試劑盒
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9.測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
應(yīng)用[4][5]
用于組織因子和自噬在慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型肺血管重塑中的作用研究
建立慢性血栓栓塞性肺動(dòng)脈高壓（CTEPH）大鼠模型,檢測(cè)其組織因子（TF）和自噬的表達(dá)情況,并探討TF和自噬在CTEPH大鼠模型肺血管重塑過程中的相關(guān)性及作用。
方法:大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（n=45）和實(shí)驗(yàn)組（n=45）,根據(jù)觀察時(shí)間每一組進(jìn)一步分為1周（n=15）、2周（n=15）、4周（n=15）三個(gè)組;實(shí)驗(yàn)組中,將大鼠的自體血凝塊經(jīng)左頸外靜脈重復(fù)注入肺動(dòng)脈以誘導(dǎo)CTEPH動(dòng)物模型;假手術(shù)組除用等量的生理鹽水替代自體血凝塊外,其余操作均同實(shí)驗(yàn)組。
注血凝塊1周、2周、4周后:測(cè)量大鼠的平均肺動(dòng)脈壓力（m PAP）,觀察大鼠肺組織病理和檢測(cè)大鼠肺動(dòng)脈管壁面積/管總面積（WA/TA）,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）和發(fā)色底物法分別檢測(cè)大鼠血漿TF抗原表達(dá)水平和活性水平,用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠肺動(dòng)脈TF、Beclin-1和LC3B蛋白表達(dá)的部位,用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法和免疫印跡法檢測(cè)大鼠肺動(dòng)脈TF、Beclin-1和LC3B m RNA和蛋白的表達(dá)水平,并進(jìn)行比較和相關(guān)性分析。
結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組三個(gè)組大鼠m PAP和肺動(dòng)脈WA/TA明顯高于假手術(shù)組（18.97±3.87mm Hg vs.14.4±2.66 mm Hg,21.89±4.22 mm Hg vs.13.9±2.82 mm Hg,25.17±4.74 mm Hg vs.14.1±3.12 mm Hg;46.67±8.50 vs.31.2±6.25,49.06±8.82 vs.30.1±6.01,54.03±10.26 vs.32.8±6.83）,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）;實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿TF抗原含量（134.89±49.39 pg/ml,159.92±67.07pg/ml,174.90±53.38pg/ml）明顯高于假手術(shù)組（83.24±21.90pg/ml,82.45±22.76pg/ml和83.92±24.11pg/ml）,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）;
實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿TF抗原活性（103.38±22.05p M/ml,119.54±26.70 p M/ml,117.12±19.14p M/ml）明顯高于假手術(shù)組（62.62±16.06p M/ml,60.15±17.23p M/ml和61.87±16.69 p M/ml）,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）;實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈TF m RNA和蛋白的表達(dá)水平明顯高于假手術(shù)組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）;實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈Beclin-1m RNA和蛋白的表達(dá)水平明顯低于假手術(shù)組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）;
實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈LC3B m RNA和蛋白的表達(dá)水平明顯低于假手術(shù)組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）;實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿TF活性與肺動(dòng)脈WA%呈正相關(guān)（r=0.972,P＜0.05）與m PAP呈正相關(guān)趨勢(shì)（r=0.914,P＞0.05）;實(shí)驗(yàn)組大鼠m PAP與肺動(dòng)脈WA/TA成正相關(guān)（r=0.955,P＜0.05）;實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈Beclin-1和LC3B蛋白表達(dá)水平與WA/TA均成負(fù)相關(guān)（r=-0.963,P＜0.05;r=-0.965,P＜0.05）;實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈TF蛋白表達(dá)水平與Beclin-1和LC3B蛋白表達(dá)水平均成負(fù)相關(guān)（r=-0.995,P＜0.05;r=-0972,P＜0.05）。
參考文獻(xiàn)
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