M-MLV 逆轉錄酶是一種以單鏈 RNA、DNA 或 RNA:DNA 雜交體為模板合成互補 DNA 鏈的重組 DNA 聚合酶。與 AMV RT 相比，莫洛尼鼠白血病病毒逆轉錄酶 (M-MLV RT) 缺乏 DNA 核酸內切酶活性，RNase H 活性較低。

和普通的M-MLV 逆轉錄酶相比，缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性，不能夠選擇性剪切RNA和DNA雜合雙鏈中的RNA，可以合成長片段從DNA。

M-MLV 逆轉錄酶(RNase H-)可以合成長達9～13kb的cDNA。該反轉錄酶的最適反應溫度為42～45℃并且在55℃時仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反轉錄酶(RNase H-)在37℃反應時的一些不足。

用途：

M-MLV 逆轉錄酶(RNase H-)常用于在獲得總RNA或mRNA后cDNA條鏈的合成。合成的cDNA條鏈后續(xù)可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二條鏈的合成等。