背景[1-5]
MAP1b(MAP5)抗體(小鼠單抗)是用MAP1b蛋白對小鼠進行系統(tǒng)免疫再取出脾臟細胞賽選出只分泌單一MAP1b蛋白的B淋巴細胞，再將此B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行雜交。最后制得分泌單一MAP1b蛋白和無限增值的雜交細胞。MAP1b也稱MAP5，MAPIX或MAP1.2，是腦發(fā)育過程中微管(microtubule)的主要結(jié)合蛋白。MAP1b的表達水平在腦的發(fā)育過程中發(fā)生改變。MAP1b在新生大鼠腦中的表達水平很高，但在成年大鼠腦中的表達水平要低10倍左右。
隨著MAP1b水平的下調(diào)，神經(jīng)系統(tǒng)逐漸發(fā)育成熟。對于培養(yǎng)的PC12，NGF刺激后MAP1b的蛋白水平可以升高10倍左右。這種MAP1b的上調(diào)和NGF誘導的neurite outgrowth密切相關。MAP1b是軸突形成過程中最早出現(xiàn)在軸突中的MAP，當新生的軸突剛從細胞體上形成時MAP1b就可以被檢測到。由于MAP1b的蛋白水平和PC12或SNKH等細胞的分化程度直接相關，常用Western檢測MAP1b水平的方法來更加便捷和準確地研究PC12或SNKH等細胞的分化情況。
MAP1b抗體也常被用于免疫染色來觀察neurite outgrowth。微管相關蛋白家族被認為參與微管組裝，這是神經(jīng)發(fā)生的必要步驟。該基因的產(chǎn)物是前體多肽，其可能經(jīng)歷蛋白水解加工以產(chǎn)生最終的MAP1B重鏈和LC1輕鏈。小鼠微管相關蛋白1B基因的基因敲除研究表明在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能中起重要作用。已經(jīng)描述了兩種可變剪接的轉(zhuǎn)錄物變體。
微管相關蛋白1B(microtubule associated protein 1B,MAP1B)是神經(jīng)細胞骨架蛋白的重要成分,廣泛表達于中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng),分布于神經(jīng)元胞體、軸突、樹突和突觸部位,可以調(diào)節(jié)微管動力學狀態(tài)并促進微管聚合成束,對軸突導向、延長及突觸發(fā)育起重要作用。
研究應用[5][6][7]
1.用于研究微管相關蛋白1B在FMR1基因敲除小鼠睪丸間質(zhì)細胞中的表達
對不同周齡的Fmr1基因敲除和野生型雄性小鼠睪丸組織微管相關蛋白1B的表達進行分析比較,探討Fmr1基因敲除小鼠的睪丸間質(zhì)細胞微管相關蛋白1B表達的差異。方法采用不同周齡(4、6、8、10周)的FMR1基因敲除型(KO)和野生型(WT)各6只,先采用聚合酶鏈式反應(PCR)技術對KO小鼠和WT小鼠進行基因型鑒定,之后所有小鼠麻醉取睪丸組織、石蠟包埋切片進行HE染色對比觀察Fmr1小鼠睪丸組織的形態(tài),最后用免疫組織化學染色技術對KO小鼠和WT小鼠睪丸微管相關蛋白1B的表達進行檢測并作對比分析。
結(jié)果微管相關蛋白1B在4～10周小鼠睪丸間質(zhì)細胞陽性表達,8、10周為強陽性表達,且KO小鼠在睪丸的陽性表達均高于WT小鼠。結(jié)論微管相關蛋白1B在同周齡FMR1基因敲除小鼠睪丸間質(zhì)細胞的表達均顯著高于WT小鼠,提示微管相關蛋白1B可能參與脆性X綜合征巨睪癥的發(fā)病過程。
2.用于研究微管相關蛋白1B和突觸素Ⅰ在FMR1基因敲除小鼠腦組織中的表達及相關性
方法:將小鼠分為成年基因敲除(KO)組、成年野生(WT)組、新生KO組、新生WT組4組,每組10只,用免疫組化法檢測MAP1B及突觸素Ⅰ(synapsinⅠ,SYN)的分布和表達。用圖像分析儀分別對大腦皮質(zhì)、海馬及小腦DAB顯色的平均光密度值(MOD)進行采集,分析不同基因型及不同年齡組MAP1B與SYN在各腦區(qū)MOD值的差異,以及二者之間的相關性。
結(jié)果:成年KO組及新生KO組小鼠各個腦區(qū)中MAP1B與SYN的改變均無明顯相關(P>0.05)。結(jié)論:FMR1基因敲除小鼠MAP1B與SYN的表達之間并無顯著相關關系,提示MAP1B在脆性X綜合征的發(fā)病機制中不是通過調(diào)節(jié)突觸數(shù)量的改變起作用的。
3.用于研究神經(jīng)元分化相關蛋白Dok5和MAP1B的功能研究
MAP1B是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中最先表達的微管相關蛋白，通過調(diào)節(jié)微管動力學行為在神經(jīng)發(fā)育和神經(jīng)元分化過程中發(fā)揮重要作用。免疫共沉淀試驗證明Dok5在體內(nèi)能與磷酸化的LC1相互作用。
用免疫熒光對Dok5和LC1的細胞內(nèi)定位研究發(fā)現(xiàn)Dok5主要在質(zhì)膜上呈不連續(xù)分布，其與LC1在共定位于細胞的質(zhì)膜附近。MAP1B與Dok5的相互作用對闡釋Dok5在神經(jīng)系統(tǒng)中的功能提供了新的線索。同時我們還初步嘗試了用串聯(lián)親和純化方法尋找與Dok5相互作用的蛋白復合體以獲得更多的功能信息，為全面闡釋Dok5在神經(jīng)元分化中的作用奠定基礎。
參考文獻
[1] Lien LL,Boyce FM,Kleyn P,Brzustowicz LM,Menninger J,Ward DC,Gilliam TC,Kunkel LM(Oct 1991).
[2] "Mapping of human microtubule-associated protein 1B in proximity to the spinal muscular atrophy locus at 5q13".Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.88(17):7873–6.
[3] "Entrez Gene:MAP1B microtubule-associated protein 1B".
[3]Opal P,Garcia JJ,Propst F,Matilla A,Orr HT,Zoghbi HY(Sep 2003)
"Mapmodulin/leucine-rich acidic nuclear protein binds the light chain of microtubule-associated protein 1B and modulates neuritogenesis".J.Biol.Chem.278(36):34691–9.
[4] Dallol A,Agathanggelou A,Fenton SL,Ahmed-Choudhury J,Hesson L,Vos MD,Clark GJ,Downward J,Maher ER,Latif F(Jun 2004)."RASSF1A interacts with microtubule-associated proteins and modulates microtubule dynamics".Cancer Res.64(12):4112–6.
[5] 神經(jīng)元分化相關蛋白Dok5和MAP1B的功能研究[D].花芳.中國協(xié)和醫(yī)科大學.2005
[6] 韋朝霞,易詠紅,孫衛(wèi)文,蘇濤,鄧維意,廖衛(wèi)平.微管相關蛋白1B和突觸素Ⅰ在FMR1基因敲除小鼠腦組織中的表達及相關性[J].實用醫(yī)學雜志,2008(14):2381-2383.
[7] 楊乙,劉緒紅,陳俊,譚旭東,陳盛強,孫衛(wèi)文,黃越玲,戴麗軍.微管相關蛋白1B在FMR1基因敲除小鼠睪丸間質(zhì)細胞中的表達[J].解剖學研究,2013,35(03):216-219+242.