背景^[1-3]

KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系是一種人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系，由Karpas等人于1986年建立。該細(xì)胞系來源于一名60歲男性患者的淋巴結(jié)，最初被診斷為Burkitt淋巴瘤。然而，隨后的研究表明，該細(xì)胞系可能代表一種新的、未被充分認(rèn)識(shí)的B細(xì)胞淋巴瘤亞型。

KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系具有一些獨(dú)特的生物學(xué)特性。首先，它是一種非腫瘤性細(xì)胞系，這意味著它并不具有腫瘤細(xì)胞的惡性特性。其次，該細(xì)胞系具有自我更新和分化能力，可以產(chǎn)生具有不同功能的子代細(xì)胞。此外，KARPAS-422細(xì)胞系還表達(dá)多種與B細(xì)胞分化相關(guān)的表面標(biāo)記物，如CD19、CD20和膜免疫球蛋白。

KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系在淋巴瘤研究領(lǐng)域具有重要價(jià)值。它是一種理想的研究模型，可用于研究B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制、藥物篩選和免疫治療等方面的研究。此外，KARPAS-422細(xì)胞系還可以用于開發(fā)新型的免疫療法和疫苗，以治療和預(yù)防B細(xì)胞淋巴瘤。

KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系

KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系可以用于CIK細(xì)胞與DC共培養(yǎng)抗B細(xì)胞淋巴瘤作用研究

探討健康人群DC-CIK細(xì)胞對(duì)不同B-NHL細(xì)胞的殺傷活性。為異體DC-CIK細(xì)胞免疫治療更好的應(yīng)用于臨床做準(zhǔn)備。

方法1.抽取健康志愿者或B-NHL患者外周血50ml,常規(guī)單個(gè)核細(xì)胞提取法分離提取單個(gè)核細(xì)胞,于37℃、5%C02、飽和濕度培養(yǎng)箱中孵育2h；收集貼壁細(xì)胞用于誘導(dǎo)培養(yǎng)DC,非貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)CIK細(xì)胞,分別培養(yǎng)9d；將成熟DC與CIK細(xì)胞混合培養(yǎng)6d,以單純CIK細(xì)胞作為對(duì)照組。

2. 用倒置顯微鏡觀察KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系細(xì)胞形態(tài)變化；細(xì)胞計(jì)數(shù)儀采用臺(tái)盼藍(lán)染色法計(jì)數(shù)。

3. 采用流式細(xì)胞儀于培養(yǎng)第9d檢測DC細(xì)胞免疫表型；于第12d、15d檢測CIK細(xì)胞及DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞免疫表型。

4. 于培養(yǎng)第15d收集培養(yǎng)細(xì)胞上清液,采用ELISA法檢測IFN-γ、IL-12和TNF-α細(xì)胞因子分泌量。

5. 采用MTT比色法檢測效靶細(xì)胞比5：1、10：1、20：1條件下,CIK細(xì)胞、DC-CIK細(xì)胞對(duì)B-NHL細(xì)胞的殺傷活性。

結(jié)果1.CIK細(xì)胞與DC共培養(yǎng)后,其增殖活性和殺傷活性顯著增強(qiáng)。共培養(yǎng)細(xì)胞組CD3+CD8+和CD3+CD56+雙陽性細(xì)胞比例、細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12分泌量均明顯高于單純CIK細(xì)胞組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2. 健康人群和NHL患者相比,細(xì)胞培養(yǎng)第15d DC-CIK細(xì)胞數(shù)量、CD3+CD8+和CD3+CD56+雙陽性細(xì)胞比例、細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12分泌量均明顯增加。2組細(xì)胞對(duì)KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系細(xì)胞均顯示出較強(qiáng)的殺傷活性,在同一效靶比條件下,健康人群組DC-CIK細(xì)胞抗腫瘤作用明顯優(yōu)于NHL患者組。

3. 健康人群DC-CIK細(xì)胞對(duì)不同B-NHL細(xì)胞(SU-DHL4細(xì)胞、KARPAS-422人類B細(xì)胞淋巴瘤懸浮細(xì)胞系細(xì)胞、KARPAS422細(xì)胞)均有較強(qiáng)細(xì)胞毒作用,且隨效靶比增加殺傷作用增強(qiáng)。

結(jié)論：CIK細(xì)胞與DC共培養(yǎng)后,其增殖活性和殺傷活性顯著提高。與NHL患者相比,細(xì)胞培養(yǎng)第15d健康人群DC-CIK細(xì)胞抗腫瘤作用明顯增強(qiáng),且健康人群DC-CIK細(xì)胞對(duì)不同非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞均有細(xì)胞毒作用。

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