膠原蛋白(也稱膠原)是動物體中含量最豐富的一類蛋白質家族，其具有很強的生物活性及生物功能，能參與細胞的遷移、分化和繁殖，使結締組織具有機械強度，同時膠原蛋白還能促進細胞生長，具有止血、生物相容性和生物降解性能。重組人源膠原蛋白是根據人膠原蛋白的特性和主要功能域，重新優(yōu)化設計基因序列的產物。 此外，其可以促進皮膚修復和再生。

性狀

重組人源膠原蛋白形態(tài)—固態(tài)：白色或類白色海綿狀固體；液態(tài)：無色澄明液體。

pH(1%水溶液)：4.0-8.0

功效

重組人源膠原蛋白可以促進皮膚修復和再生。

制備方法

隨著DNA重組技術迅速發(fā)展，為了能充分利用膠原蛋白的優(yōu)良特性，科研工作者開始尋求動物本身以外的膠原蛋白來源。有許多學者利用基因工程技術．選用各種宿主細胞(包括：哺乳動物、昆蟲、酵母、大腸桿菌、轉基因煙草、轉基因鼠、轉基因蠶細胞等)，生產重組人膠原蛋白，產品具有安全性好、重現(xiàn)性好、質量穩(wěn)定等優(yōu)點。但是，同樣存在著許多不足和困難。

本發(fā)明的目的在于提供一種利用巴氏畢赤酵母進行表達的重組人源膠原蛋白，其具有優(yōu)于動物體膠原蛋白的獨特的化學結構和性能，同時提供該重組人源膠原蛋白的制備方法。 

實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術解決方案為：一種重組人源膠原蛋白，氨基酸序列如SEQ NO.3，其含有599個氨基酸，分子量為55.0kDa。 

一種重組人源膠原蛋白的制備方法，步驟如下： 

（1）表達重組人源膠原蛋白基因工程菌的構建，得到巴氏畢赤酵母基因工程菌；

（2）對基因工程菌進行發(fā)酵培養(yǎng)，實現(xiàn)重組人源膠原蛋白的誘導表達，得到含有重組人源膠原蛋白的發(fā)酵液；

（3）從發(fā)酵液中純化重組人源膠原蛋白。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，其顯著優(yōu)點：

(1)設計的人源膠原蛋白基因Ge1是全新的序列，且長度上大大少于天然人膠原蛋白基因(數Kbp)，實現(xiàn)了在分子水平的操作簡單化，更易實現(xiàn)膠原蛋白的基因工程菌發(fā)酵生產；

(2)該人源膠原蛋白基因Ge1同時包含天然人膠原蛋白基因的特征，其表達的蛋白將具有天然人膠原蛋白的優(yōu)良特征；

(3)在人源膠原蛋白的分子長度方面，通過制備不同重復數同向串聯(lián)基因重組質粒，可在進一步的酵母表達研究中實現(xiàn)接近較大的分子量的天然人膠原蛋白的重組人源膠原蛋白的表達生產；

(4)該種不同重復數同向串聯(lián)基因重組質粒的制備方法，僅僅通過簡單的體外酶切連接反應和具有成熟技術的原核轉化和篩選，實現(xiàn)了任意重復數的目的基因(重組人源膠原蛋白基因Ge1)的串聯(lián)連接；

(5)該法比較現(xiàn)有的許多應用PCR技術實現(xiàn)重復更具有可行性和更易獲得成功，避免了達到重復串聯(lián)目的基因的PCR操作中需要的高難度的引物設計和條件探索工作；

(6) 可誘導表達的畢赤酵母工程菌能實現(xiàn)重組人源膠原蛋白在胞內和胞外的高水平表達，其培養(yǎng)易于放大，并可利用高密度發(fā)酵方式高產目的蛋白，分泌表達有利于表達產物的分離純化，降低生產成本，且其對所表達的外源蛋白有一定的翻譯后修飾功能，如糖基化等。

參考文獻

CN102443057A