背景[1-3]
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒是一種用于科研實驗的檢測工具，專門用于定量檢測小鼠樣本中低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)的含量。HIF1α是一種轉(zhuǎn)錄因子，它在低氧條件下穩(wěn)定并激活，進(jìn)而調(diào)控一系列與氧平衡相關(guān)的基因表達(dá)。
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)原理，通過特異性抗體與樣本中的HIF1α結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物，再與酶標(biāo)抗體結(jié)合，經(jīng)過洗滌、顯色等步驟，最終通過酶標(biāo)儀測定吸光度來計算樣本中HIF1α的濃度。
二、產(chǎn)品特點
高靈敏度：能夠檢測低濃度的HIF1α，有助于更準(zhǔn)確地評估小鼠在低氧環(huán)境下的生理反應(yīng)。
高特異性：試劑盒中的抗體經(jīng)過嚴(yán)格篩選和驗證，確保只與HIF1α特異性結(jié)合，減少交叉反應(yīng)。
重復(fù)性好：經(jīng)過多次實驗驗證，試劑盒具有良好的重復(fù)性，確保實驗結(jié)果的可靠性。
操作簡便：試劑盒附帶詳細(xì)的操作說明書，用戶只需按照說明書步驟操作即可完成實驗。
三、適用范圍
該試劑盒適用于小鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)的定量檢測。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的科研實驗。
四、保存與運輸
保存條件：試劑盒應(yīng)保存在2-8℃的環(huán)境中，避光防潮。避免反復(fù)凍融以確保試劑盒的穩(wěn)定性。
運輸方式：一般采用快遞運輸方式，確保試劑盒在運輸過程中的溫度和濕度條件符合要求。
五、注意事項
有效期：注意檢查試劑盒的有效期，確保在有效期內(nèi)使用。
操作規(guī)范：嚴(yán)格按照說明書上的步驟操作，避免操作失誤影響實驗結(jié)果。
樣本處理：正確處理樣本，避免樣本污染和降解對實驗結(jié)果的影響。
應(yīng)用實例[4][5]
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒可以用于TAB1介導(dǎo)糖酵解在高糖誘導(dǎo)的骨髓來源巨噬細(xì)胞極化中的作用與機制
研究采用高糖刺激小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs),并采用si RNA技術(shù)敲低BMMs的TAB1,探尋TAB1調(diào)控巨噬細(xì)胞糖酵解與信號下游分子NF-k B/HIF-1α的關(guān)系,以及TAB1/NF-κB/HIF-1α信號通路在DN巨噬細(xì)胞極化糖酵解的作用及分子機制,為DN防治提供新策略。
方法1.提取并培養(yǎng)C57BL/6J雄性小鼠BMMs;2.流式細(xì)胞術(shù)法鑒定BMMs的純度及成熟度;3.si RNA TAB1轉(zhuǎn)染BMMs,篩選出轉(zhuǎn)染最適條帶;4.高糖刺激下不同時間點觀察己糖激酶1(Hexokinase 1,HK1),磷酸果糖激酶2(6-phosphofructose-2-kinase,PFKFB3),乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase A,LDHA),TAB1,NF-κB p65和HIF-1α蛋白表達(dá)變化;5.分組:甘露醇對照組(D-mannitol),陰性si RNA對照組(control si RNA),空白對照組(control),高糖刺激組(HG),TAB1 si RNA組(TAB1 si RNA),TAB1 si RNA高糖刺激組(TAB1 si RNA+HG),糖酵解抑制劑組(2DG),糖酵解抑制劑+高糖刺激組(2DG+HG)。6.激光共聚焦法觀察各組BMMs糖酵解酶HK1,PFKFB3,LDHA及M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物i NOS的表達(dá)變化;7.RT-PCR法檢測各組細(xì)胞中MCP-1和IL-1βm RNA的表達(dá)變化,以及糖酵解酶HK1,PFKFB3和LDHA的m RNA表達(dá)變化;8.收集各組細(xì)胞上清,用ELISA試劑盒檢測炎性細(xì)胞因子MCP-1和IL-1β的分泌情況;9.乳酸產(chǎn)生試劑盒及葡糖糖吸收試劑盒檢測各組細(xì)胞乳酸產(chǎn)生及葡萄糖吸收功能變化;10.Western blot及小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒檢測各組細(xì)胞HK1,PFKFB3,LDHA,TAB1,NF-κB p65和HIF-1α蛋白表達(dá)變化。
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒結(jié)果1.流式細(xì)胞術(shù)檢測實驗培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞,采用F4/80、CD11b雙標(biāo)記鑒定巨噬細(xì)胞的純度及成熟度,結(jié)果示雙標(biāo)記成功率為90.6%,滿足實驗要求。2.激光共聚焦結(jié)果顯示,與control組相比,HG組HK1,PFKFB3,LDHA和i NOS綠色熒光均明顯增強,而TAB1 si RNA組及2DG組上述指標(biāo)綠色熒光強度無明顯差異;與HG組相比,TAB1 si RNA+HG組及2DG+HG組上述指標(biāo)綠色熒光強度減弱。3.小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)ELISA試劑盒ELISA結(jié)果顯示,與control組相比,HG組細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MCP-1和IL-1β均明顯升高(p<0.01),TAB1 si RNA組及2DG組培養(yǎng)基上清液中MCP-1和IL-1β差異無統(tǒng)計學(xué)意義;與HG組相比,TAB1 si RNA+HG組及2DG+HG組細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中MCP-1,IL-6和IL-1β均明顯下降(p<0.01)。
參考文獻(xiàn)
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[5]段分分.TAB1介導(dǎo)糖酵解在高糖誘導(dǎo)的骨髓來源巨噬細(xì)胞極化中的作用與機制[D].安徽醫(yī)科大學(xué),2018.