無血清細(xì)胞凍存液，含有5%的二甲基亞砜（DMSO），對(duì)細(xì)胞的毒性較低；不含動(dòng)物來源性蛋白或血清，配方成分明確，不僅適用于常規(guī)細(xì)胞系、原代細(xì)胞，同時(shí)亦適合于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。

使用方法

（一） 細(xì)胞凍存

1. 取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，加入 PBS 清洗細(xì)胞；

2. 去除 PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面） 室溫孵育 2~3 min，把單層生長細(xì)胞消化下來；

3. 加入雙倍體積的完全培養(yǎng)基或胰酶終止劑終止細(xì)胞消化（如果凍存細(xì)胞為懸浮細(xì)胞按照步驟 4-8 進(jìn)行操作）；

4. 將消化后的細(xì)胞懸液或者懸浮細(xì)胞液轉(zhuǎn)移至離心管中，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；

5. 室溫 1000 rpm 離心 5 min；棄掉上清液；

6. 加入適量 4℃預(yù)冷的無血清細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞沉淀，制成細(xì)胞懸液（按照細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存液的量，推薦凍存密度：5x105 至 1x107cells/mL；

7. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管 1～1.5 ml； 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者等信息；

8. 針對(duì)常規(guī)腫瘤細(xì)胞：將凍存液重懸后的細(xì)胞直接放入-80℃冰箱，過夜后轉(zhuǎn)入至液氮罐中 長期保存。針對(duì)難養(yǎng)或珍貴細(xì)胞：將凍存液重懸后的細(xì)胞放入程序降溫盒，或者程序降溫后再放入-80℃冰箱，過夜后轉(zhuǎn)入至液氮罐中長期保存。

（二） 細(xì)胞復(fù)蘇

1. 將水浴鍋溫度調(diào)至 37℃，取出凍存管快速置于水浴鍋內(nèi)，晃動(dòng)凍存管直至管中凍存細(xì)胞融化成液體；

2. 將溶解的細(xì)胞凍存懸液轉(zhuǎn)移至含有 5-10 倍體積完全培養(yǎng)基的離心管中，待凍存管中細(xì)胞完全融化后，將凍存細(xì)胞懸液緩慢加入離心管中，輕輕混勻；

3. 室溫 1000 rpm 離心 5 min； 去除上清液，加入已回溫的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，取適量的細(xì)胞懸液接種到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；

4. 將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中，按常規(guī)方法培養(yǎng)。