簡介

5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-異丁?；B苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基)亞磷酰胺為白色至類白色疏松泡沫狀固體，極易吸潮；常溫下可完全溶于無水乙腈、二氯甲烷、DMF等常規(guī)有機(jī)溶劑，微溶于甲醇或乙醇，幾乎不溶于水。作為亞磷酰胺單體，須在干燥惰性氣氛（氬氣或氮?dú)猓┘皑C20 °C條件下避光保存。

5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-異丁?；B苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基)亞磷酰胺的性狀

制備

將激活劑堿（1.1至1.2等量）添加到溶劑中，隨后在環(huán)境溫度下將0.95至1.1等量的激活劑酸添加到溶劑中以形成激活劑溶液。將約1等量的受保護(hù)核苷溶解在單獨(dú)容器中約10等量的溶劑中，然后在減壓下蒸餾出約3等量的溶劑。將約1 ~ 1.2等量的2-氰乙基-N，N,N′，N′-四異丙基磷二胺在室溫下加入核苷混合物中，然后將之前制備的活化劑溶液加入核苷混合物中，并在室溫下劇烈攪拌。12小時后，用甲苯稀釋反應(yīng)混合物，用水沖洗。將有機(jī)層分離，必要時用硫酸鈉干燥，并在減壓下濃縮。然后使用高效液相色譜技術(shù)計算所需中間體的產(chǎn)率，也就是說，使用適當(dāng)?shù)南疵撘簩⑺卯a(chǎn)品混合物通過高效液相色譜柱，并使用高效液相色譜峰下的面積來確定混合物中產(chǎn)品的產(chǎn)率。根據(jù)本發(fā)明，這些實例說明了幾種受保護(hù)的核苷試劑與2-氰乙基-N，N，N‘，N’-四異丙基磷二胺在Hunig堿基- tfa活化劑存在下的磷酸化。根據(jù)示例1-11的通用程序，將公式III（下）的7種核苷試劑與2-氰乙基-N，N，N‘，N’-四異丙基磷二胺在Hunig堿- tfa活化劑存在下反應(yīng)，通過兩種方法中的一種計算產(chǎn)物得率：(1)使用合適的洗脫液將所得產(chǎn)物混合物通過HPLC柱，HPLC峰下面積用于確定混合物中產(chǎn)物得率%；或者在短硅膠柱上使用甲基乙酸/甲苯混合物（濃度取決于被純化的特定產(chǎn)品）純化所得產(chǎn)物。適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品餾分在減壓和溶劑下濃縮，直到獲得所需酰胺的約50%溶液。將該溶液加入約5至25等量的石油醚，沉淀出用石油醚過濾和洗滌的產(chǎn)物。然后將產(chǎn)品干燥，稱重，并計算收率的百分比得到終產(chǎn)物5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-[(叔丁基)二甲基硅基]-N-異丁?；B苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基)亞磷酰胺[1]。

參考文獻(xiàn)

[1] Werner, Christian; et al. Phosphitylation of nucleosides with 2-cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphorodiamidite using amine-acid complex activators in synthesis of DNA. World Intellectual Property Organization.