簡介
UDP葡萄糖醛酸是一種重要的生物分子，通常呈現(xiàn)為白色晶體或粉末狀。它具有特定的溶解性，一般在水中微溶，但在極性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑中可能有一定的溶解度。UDP葡萄糖醛酸在生物體內(nèi)扮演著關(guān)鍵角色，它參與多種生物化學(xué)反應(yīng)。
UDP葡萄糖醛酸的性狀
合成
方法一：將葡萄糖醛酸（63 mg）、ATP （1.5 eq.）和UTP （1.5 eq.）溶于水中，放入15ml離心管中，其中含有MES緩沖液（100 mM, pH 6.5）和MgCl2 （10 mM）。加入適量AtGlcAK （3mg）、腮紅蛋白（4mg）、PmPpA （2.5 mg）至混合物中。加水使反應(yīng)混合物的總積達(dá)到10ml。將溶液在恒溫培養(yǎng)箱中37°C溫和搖晃36小時(shí)。用對(duì)茴香醛糖染色薄層色譜（EtOH:H2O = 7:3）監(jiān)測(cè)產(chǎn)物形成。用同樣體積的冰鎮(zhèn)乙醇使反應(yīng)熄滅。4℃孵育30分鐘后離心。收集上清，通過BioGel P-2凝膠過濾柱得到產(chǎn)物UDP葡萄糖醛酸[1]。
方法二：在20 mL反應(yīng)體系中進(jìn)行制備級(jí)合成UDP-GlcA，反應(yīng)體系中含有50 mM pH 8.0 Tris-HCl緩沖液，20 mM GlcA, 22 mM ATP, 22 mM UTP， 20 mM MgCl2和0.1-2 mg不同的酶。使用0.6 mg AtGlcAK， 0.4 mg AtUSP和0.1 mg EcPpA合成UDP-GlcA。將反應(yīng)混合物在37℃下輕搖孵育4-12小時(shí)。用薄層色譜法監(jiān)測(cè)udp -糖的生成（異丙醇：NH4OH:H2O=7:3:2）。將90%的單糖轉(zhuǎn)化為udp糖。煮沸5分鐘使反應(yīng)停止。將反應(yīng)混合物離心以除去沉淀物。濃縮反應(yīng)混合物進(jìn)行分離。通過凝膠過濾（bio-gel P2, bio-rad）從反應(yīng)混合物中分離udp -糖。把含有生成物的分?jǐn)?shù)混合起來。凍干餾分得到UDP葡萄糖醛酸[2]。
用途
UDP葡萄糖醛酸在用于研究酶的催化活性和產(chǎn)物的生成。例如：UDP葡萄糖醛酸（0.27 mg, 0.29 μmol）與PmHS2（40 μg, 20 μg mL-1）在含有Tris （0.70 mg, 5.8 μmol）、MnCl2 （0.43 mg, 3.5 μmol）和UDP-GlcNTFA （0.21 mg, 0.35 μmol）的水緩沖液（2 mL, pH 7.2）中室溫孵育過夜。通過LC-MS分析監(jiān)測(cè)酶促反應(yīng)的完成情況。反應(yīng)溶液（2ml）經(jīng)FSPE濾池（2g）以80% MeOH洗脫得到化合物[3]。
參考文獻(xiàn)
[1] Improved one-pot multienzyme (OPME) systems for synthesizing UDP-uronic acids and glucuronides. By: Muthana, Musleh M.; et al. Chemical Communications (Cambridge, United Kingdom) (2015), 51(22), 4595-4598.
[2] Comparing substrate specificity of two UDP-sugar pyrophosphorylases and efficient one-pot enzymatic synthesis of UDP-GlcA and UDP-GalA. By: Guo, Yuxi; et al. Carbohydrate Research (2015), 411, 1-5.
[3] Fluorous-Assisted Chemoenzymic Synthesis of Heparan Sulfate Oligosaccharides. By: Cai, Chao; et al. Organic Letters (2014), 16(8), 2240-2243.