概述
SOC培養(yǎng)基是一種用于大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化后復(fù)蘇的微生物液體培養(yǎng)基，主要成分為胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂及葡萄糖等物質(zhì)[1]。其采用低鹽配方，通過(guò)補(bǔ)充多肽、氨基酸和可溶性維生素增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)成分，相較于LB培養(yǎng)基能有效提升細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率和蛋白表達(dá)量；氯化鈉、氯化鎂等礦物質(zhì)離子可激活代謝酶系，菌株活力提升顯著；葡萄糖作為分解代謝抑制物，優(yōu)先供能同時(shí)阻斷其他碳源代謝，實(shí)測(cè)復(fù)蘇后菌落生長(zhǎng)速度較LB培養(yǎng)基可以提升30%以上。
應(yīng)用
文獻(xiàn)公開(kāi)了一種乙型肝炎病毒分離株復(fù)制型質(zhì)粒的構(gòu)建方法，包括(1)HBV全長(zhǎng)基因組的抽提，PCR擴(kuò)增和克隆構(gòu)建；(2)重組過(guò)渡載體的構(gòu)建；(3)重組過(guò)渡載體的酶切與去磷酸化；(4)復(fù)制型質(zhì)粒的構(gòu)建，所述重組過(guò)渡載體由三個(gè)連接片段同時(shí)定向連接，兩個(gè)插入的HBV片段之間形成兩個(gè)反向的BspQI酶切位點(diǎn)，使用SOC培養(yǎng)基進(jìn)行HBV全長(zhǎng)基因組克隆和復(fù)制型質(zhì)粒的菌落培養(yǎng)擴(kuò)增。該發(fā)明應(yīng)用了新型的全長(zhǎng)基因組克隆載體，改進(jìn)了酶切方案以及采用了新型菌落培養(yǎng)基，具有方法簡(jiǎn)捷，高效穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，可對(duì)中國(guó)的HBV臨床分離株全基因組進(jìn)行全面綜合的表型研究，具有重要的應(yīng)用價(jià)值[2]。
有關(guān)研究
惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)KT2440是模式環(huán)境微生物菌株，也是異源表達(dá)的良好宿主菌。研究人員通過(guò)條件優(yōu)化，建立了高效的電轉(zhuǎn)化方法。EM培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體至D600nm=0.6～0.75，冰冷的3mmol/L4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES，pH=7.0)的緩沖液洗滌菌體3次，菌體濃縮300倍，50μL分裝并用于一次電轉(zhuǎn)化。電轉(zhuǎn)化條件：1.2kV，200Ω，25μF.1mL SOC培養(yǎng)基懸浮后，轉(zhuǎn)至15mL聚丙烯離心管培養(yǎng)2h，轉(zhuǎn)化效率可高達(dá)3.0×108轉(zhuǎn)化子/μg，比目前為止文獻(xiàn)報(bào)道的該菌株電轉(zhuǎn)化效率高出30倍左右。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，轉(zhuǎn)化DNA濃度與轉(zhuǎn)化子數(shù)目呈線性關(guān)系[3]。
參考文獻(xiàn)
[1]王志毅,劉杞,萬(wàn)澤生,等.從人源性噬菌體抗體庫(kù)中篩選人抗HBsAg的Fab噬菌體抗體(摘要)[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志, 2000(S1):1.DOI:CNKI:SUN:ZXGB.0.2000-S1-072.
[2]張欣欣,于德敏,張東華,等.乙型肝炎病毒分離株復(fù)制型質(zhì)粒的構(gòu)建方法:CN200910056451.6[P].
[3]陳莎莎,楊圣勇,尚廣東.惡臭假單胞菌KT2440高效電轉(zhuǎn)化方法[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào), 2010, 16(3):3.DOI:10.3724/sp.j.1145.2010.00432.