前言

2-三氟甲基吩噻嗪(2-(trifluoromethyl) phenothiazine,TFPTZ),又名三氟拉嗪主環(huán),是一種人工合成的吩噻嗪類鎮(zhèn)靜劑,在常溫下為淡黃色粉末,分子式為C13H8F3NS,相對分子質(zhì)量為267.27,2-三氟甲基吩噻嗪通常用于治療精神疾病,也可作為三氟拉嗪、氟奮乃靜的中間體。對動物具有鎮(zhèn)靜催眠、消除狂躁不安的作用。

在飼料或飲用水中違法添加2-三氟甲基吩噻嗪可以使禽畜快速增重、縮短出欄時間。在動物運(yùn)輸過程中使用2-三氟甲基吩噻嗪還可以減少體重下降和防止肉品質(zhì)降低,但殘留在動物源食品中的2-三氟甲基吩噻嗪及其代謝產(chǎn)物會對人的神經(jīng)系統(tǒng)造成不良影響,嚴(yán)重危害消費(fèi)者的身體健康。根據(jù)文獻(xiàn)要求,氯丙嗪、地西泮等僅允許治療使用,動物源食品中不得檢出，國際食品法典委員會、歐盟、澳大利亞等國家和組織均對鎮(zhèn)靜劑的最高限量值作出了規(guī)定。目前禽畜養(yǎng)殖行業(yè)中仍有一些不法分子使用2-三氟甲基吩噻嗪獲取利益,為確保動物源食品安全,亟需開發(fā)一種快速定量分析動物源食品中2-三氟甲基吩噻嗪殘留量的檢測方法。

檢測方法^[1]

1、Ic-ELISA方法的建立

抗原包被:用包被液(0.01mol/L碳酸鹽緩沖溶液)將完全抗原稀釋后包被到酶標(biāo)板上，每孔150uL,37℃孵育1h,包被液傾出，每孔加入200uL PBST洗液,靜止1min,傾去洗液,拍干,重復(fù)洗板3次。封閉:每孔加入150uL，封閉液,37℃孵育1h,洗板3次。競爭反應(yīng):每孔加入75ul用PBS稀釋16000倍的多克隆抗體和75ul稀釋后的2-三氟甲基吩噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品，37℃競爭反應(yīng)1h,傾去酶標(biāo)板中的液體,洗板3次。每孔加入150uL稀釋2000倍的酶標(biāo)二抗,37℃孵育1h,洗板3次。顯色:每孔加入150ul TMB單組分顯色劑，37℃反應(yīng)20min。加入終止液(體積分?jǐn)?shù)10%硫酸)50uL,上機(jī)測定OD₄₅₀。

2、Ic-ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

按上述優(yōu)化條件,將2-三氟甲基吩噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(10.00,5.00,2.50.1.00,0.50,0.25,0.10ug/L),每個質(zhì)量濃度重復(fù)3次。以O(shè)D₄₅₀為縱坐標(biāo),以2-三氟甲基吩噻嗪質(zhì)量濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,用Origin軟件進(jìn)行線性擬合,計算2-三氟甲基吩噻嗪的IC₅₀線性范圍(IC₂₀~IC₈₀)和最低檢測限(IC₁₀)。

3、實(shí)際樣品檢測及高效液相色譜(HPLC)驗(yàn)證

鮮豬肉去脂肪后做成肉糜,分別取20g,加入4ml,不同質(zhì)量濃度(5.0,12.5,25.0,50.0 ng/mL)的2-三氟甲基吩噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品，加入20mL乙腈和0.5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)40%氫氧化鈉溶液，振蕩2min,超聲10min,4 000r/min離心5min,吸取2mL上清液,氮?dú)獯蹈?用PBS稀釋至1mL,按步驟1將樣品的檢出值乘以稀釋倍數(shù),即為Ic-ELISA 法測得的豬肉樣品中2-三氟甲基吩噻嗪含量。HPLC驗(yàn)證在安捷倫1260系統(tǒng)上進(jìn)行,選用安捷倫ZORBAX SB-C₁₈分析色譜柱,流動相A為乙腈,流動相B為體積分?jǐn)?shù)0.2%的甲酸水溶液,洗脫液體積比為9:1,25℃下流速為0.2mL/min,進(jìn)樣量為20ul，檢測器為二極管陣列檢測器。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉廣興,韓曉利,李昳晴,等. 豬肉中2-(三氟甲基)吩噻嗪的Ic-ELISA檢測[J]. 河北大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）,2023,43(6):638-645. DOI:10.3969/j.issn.1000-1565.2023.06.010.