液體沙氏培養(yǎng)基(Sabouraud Dextrose Broth,簡稱SDB)是一種專為真菌(包括酵母菌和霉菌)增菌培養(yǎng)設(shè)計的液體培養(yǎng)基,以其低pH和高糖分的特性,能有效抑制大多數(shù)細菌的生長。該培養(yǎng)基由真菌學(xué)家Raymond Sabouraud于1892年配方,最初用于皮膚癬菌的培養(yǎng),現(xiàn)已成為全球藥典(如USP、EP、JP、CP)和標準方法(如GB)中推薦的通用真菌培養(yǎng)基。無論是藥品質(zhì)量控制、臨床診斷還是公共衛(wèi)生監(jiān)測，它都為真菌的準確培養(yǎng)提供了可靠的保障。

液體沙氏培養(yǎng)基的成分

液體沙氏培養(yǎng)基的配方非常簡潔,由5.0 - 10.0(g/L)的蛋白胨,20.0 - 40.0(g/L)的葡萄糖和0.01(g/L)的氯霉素組成。蛋白胨提供氮源、氨基酸、維生素等,支持真菌生長,葡萄糖提供充足的碳源和能量。高濃度糖分有助于維持低pH環(huán)境,氯霉素屬于選擇性添加劑,強力抑制細菌生長,但不影響真菌,用于處理污染嚴重的樣本。該培養(yǎng)基的核心選擇性來自其低pH值(通常為5.6 ± 0.2)。這個酸性環(huán)境非常適合真菌生長,同時能強烈抑制大多數(shù)雜菌。

應(yīng)用領(lǐng)域

根據(jù)《中國藥典》、USP、EP等藥典規(guī)定,用于藥品、生物制品中霉菌和酵母菌的無菌檢測(即檢查產(chǎn)品是否被真菌污染)。液體沙氏培養(yǎng)基用于處理皮膚癬、甲癬等臨床樣本,從混合菌群中選擇性增菌和分離致病性真菌,如念珠菌、曲霉菌、皮膚癬菌等。依據(jù)GB標準,用于一次性使用衛(wèi)生用品(如紙巾、口罩等)中真菌的定性檢測。也適用于食品、化妝品、生物負載測試等領(lǐng)域。作為基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基,用于實驗室中真菌菌株的短期保存和常規(guī)傳代培養(yǎng)。

工作原理

真菌通常耐酸,而大多數(shù)細菌在中性(pH 7.2-7.4)環(huán)境下生長最佳。液體沙氏培養(yǎng)基約5.6的pH值,使其成為真菌的適宜生長環(huán)境,而細菌則不能順利生長。高濃度的葡萄糖為快速生長的真菌提供了充足能量,蛋白胨則提供必需的氮源和生長因子,保證真菌能夠旺盛生長。

使用方法和注意事項

首先取液體沙氏培養(yǎng)基干粉(如標準SDB配方為30g/L,含抗生素的為50.1g/L)于1L純水中,加熱煮沸至完全溶解,然后121°C高壓滅菌15分鐘。若配方中含有氯霉素,需嚴格按照說明書推薦的滅菌條件(如115°C)進行操作,以防抗生素失效。

培養(yǎng)條件通?？刂圃?0-25°C或25-30°C下,需氧培養(yǎng)48-72小時。對于生長緩慢的真菌,可能需要延長至數(shù)周。在液體沙氏培養(yǎng)基中白色念珠菌(Candida albicans)應(yīng)生長良好,培養(yǎng)基變渾濁，黑曲霉(Aspergillus brasiliensis)應(yīng)形成絮狀菌絲，大腸埃希氏菌(E. coli)應(yīng)被抑制,培養(yǎng)基保持澄清。

液體沙氏培養(yǎng)基的選擇

實驗?zāi)康模毫私庖后w沙氏培養(yǎng)基對真菌檢測結(jié)果的影響，為一次性使用衛(wèi)生用品實驗室檢測提供依據(jù)。選7種不同廠家生產(chǎn)的沙氏培養(yǎng)基(含氯霉素與否)用0.9%生理鹽水倍比稀釋后進行真菌菌落總數(shù)檢測。結(jié)果:白色念珠菌(CMCC10231)、黑曲霉菌(ATCC16404)和酵母菌(ATCC18790)在7種培養(yǎng)基各稀釋度平皿上菌落生長速度、菌落形態(tài)及大小、菌落總數(shù)基本一致;金黃色葡萄球(ATCC260039)和大腸桿菌(ATCC25922)在含氯霉素沙氏培養(yǎng)基上生長均受抑制。結(jié)論:一次性使用衛(wèi)生用品真菌菌落總數(shù)檢測應(yīng)選用含氯霉素的沙氏瓊脂培養(yǎng)基,抑制細菌生長,提高實驗室的準確度。

參考文獻

[1] 吳幼玲. 幾種沙氏培養(yǎng)基真菌生長情況比較[J]. 海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 20(4): 46-47.