磺酸基-Cy5羧酸是水溶性五甲川吲哚菁類遠紅/近紅外熒光染料，為Cy5的磺化羧酸衍生物，是生物標記、熒光成像與分子檢測的核心探針前體。

合成方法

干燥三口瓶中加入0.501g化合物16、0.033g化合物14，加入乙酸酐2mL、吡啶1mL，磁力攪拌，通氮氣保護，密封。油浴升溫至110℃，保持15分鐘，溶液變深藍，反應完成。停止加熱，冷卻至室溫，加入30mL冷乙酸乙酯，劇烈攪拌，析出深藍色膠狀固體，靜置10分鐘，過濾，收集藍色固體，藍色固體用DCM浸泡洗滌2–3次（每次5mL），DCM會溶解所有PEG載體殘留，產物不溶，過濾，保留藍色固體，真空干燥。得到磺酸基-Cy5羧酸純品為深藍色粉末，收率：0.014g（23.7%），純度：HPLC>98%[1]。

應用

陳愛平就耳后注射地塞米松后藥物在局部的分布進行觀察，對藥物進入內耳的可能途徑進行初步探討。用磺酸基-Cy5羧酸標記地塞米松。豚鼠隨機分為兩組:耳后注射組和肌肉注射組。Cy5-地塞米松0.5ml進行右耳后和右臀大肌注射，用動物體內可見光成像連續(xù)觀察120h，評估藥物局部代謝的動態(tài)變化。Cy5-地塞米松0.5ml進行右耳后和右臀大肌注射，在注射后8h斷頭處死動物，用動物體內可見光成像觀察熒光標記的藥物在頭顱、顳骨、臟器的分布。Cy5-地塞米松0.5ml進行右耳后和右臀大肌注射，每天一次，連續(xù)三天，在第四天斷頭處死動物，將鼓膜、中耳粘膜、內淋巴囊、耳蝸基底膜等組織鋪片，用共聚焦顯微鏡觀察熒光標記的藥物在組織的精確分布[2]。

將磺酸基-Cy5羧酸(16.0mg,24.4umol)、TSTU(8.8mg，29.2umol,1.2當量)和DIPEA (15.3uL，87.6 umol,3.6當量)溶解在500uL DMF 中。將溶液在攪拌下放置5分鐘，然后加入溶解在500uL硼酸鹽緩沖液(2.5M,pH8)和DIPEA(3.2uL,18.4umol)中的胱胺二鹽酸鹽(8.2mg,36.5umol,1.5當量)。在環(huán)境溫度下1小時后,加入二硫蘇糖醇(6.8mg,43.8mmol,1.8當量),并且將反應介質在環(huán)境溫度下在攪拌下放置過夜。在減壓下除去溶劑,并且用反相半制備HPLC(洗脫液:H2O 0.1%TFA,ACN 0.1%TFA)進行產物純化。以藍色粉末的形式獲得二磺酸化花菁5.0-SH(7.3mg,42%)[3]。

參考文獻

[1] Jiang L L, Dou L F, Li B L. An efficient approach to the synthesis of water-soluble cyanine dyes using poly(ethylene glycol) as a soluble support[J]. Tetrahedron Letters, 2007, 48(33): 5825-5829.

[2] 陳愛平. 耳后注射糖皮質激素治療內耳疾病的實驗研究[D]. 山東:山東大學,2016. DOI:10.7666/d.Y3035950.

[3] 國家科學研究中心,勃艮第大學. 生物相容性模塊化四嗪平臺:CN201880020928.2[P]. 2019-12-13.