前言

蔗糖酶(Sucrase,β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶,fructofuranoside fructohydrolase,EC 3.2.1.26),又稱轉(zhuǎn)化酶(Invertase),能特異地催化非還原糖中的a-呋喃果糖苷鍵水解,具有相對(duì)專一性。蔗糖酶從酵母中提取,蔗糖在蔗糖酶的作用下,能得到比蔗糖溶解度更高、不易有結(jié)晶析出的高濃度轉(zhuǎn)化糖漿,還原力增加,甜度增加。

蔗糖酶主要應(yīng)用于制備蔗糖轉(zhuǎn)化糖漿，還可用于軟糖和巧克力糖軟芯中防止出現(xiàn)蔗糖結(jié)晶，另外蔗糖酶還可用于從棉籽糖制備蜜二糖和從菊粉中制備果糖，以及降低果汁中蔗糖含量等。

對(duì)酶進(jìn)行固定化開(kāi)辟了酶的許多新用途。蔗糖酶的固定化國(guó)內(nèi)外研究相對(duì)較少。包埋法是酶固定化的一種常見(jiàn)方法,條件溫和,操作簡(jiǎn)單,對(duì)酶活性影響小,有利于小分子量底物的進(jìn)入和小分子量產(chǎn)物的擴(kuò)散,適合固定化。本文利用包埋法就蔗糖酶的固定化及固定化酶的性質(zhì)作了初步研究。

蔗糖酶的固定化

3.5mg蔗糖酶,0.4g氯化鈣,0.5g明膠溶于10mL醋酸鈣緩沖溶液(25mmol/L,pH4.4)中，充分溶解,并降溫至59℃~10℃,通過(guò)6號(hào)注射器的針頭將上述冷卻液以5cm的高度滴入到100mL的1%(w/v)的海藻酸鈉溶液(用NaOH調(diào)pH8)中,過(guò)濾約得到200個(gè)微球。微球在醋酸鈣緩沖溶液(25mmol/L,pH4.4)中硬化30min后,將微球置入到20℃、1%戊二醛溶液中進(jìn)一步硬化2h，用醋酸鈣緩沖溶液(25mmol/L,pH4.4)洗滌后,固定化酶置于用醋酸鈣緩沖溶液(25mmol/L,pH4.4)中,貯存在0℃~5℃冰箱中準(zhǔn)備在實(shí)驗(yàn)中使用[1]。

蔗糖酶的活力測(cè)定

12mL酶液(稀釋率1:300,w/v)與108mL蔗糖溶液(120g/L,pH5.5醋酸溶液)混合均勻,37℃反應(yīng)10min。用DNS法測(cè)定反應(yīng)液中還原糖的量。以煮沸酶液作對(duì)照，以1min內(nèi)催化釋放1umol還原糖的酶量為1個(gè)酶活單位(U)。固定化蔗糖酶酶活測(cè)定的反應(yīng)體系同游離酶,取適量固定化酶與底物混合,均勻攪拌反應(yīng)10min,離心后取上清液,用DNS法測(cè)反應(yīng)液中還原糖的量[1]。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳雄,王金華. 固定化蔗糖酶的研究[J]. 中國(guó)釀造,2006(12):27-29. DOI:10.3969/j.issn.0254-5071.2006.12.008.