結(jié)直腸癌是全球高發(fā)的消化道惡性腫瘤，轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。EMT是腫瘤細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力的關(guān)鍵生物學(xué)過(guò)程，而ZEB1作為EMT的重要轉(zhuǎn)錄抑制因子，可直接結(jié)合E-鈣粘蛋白（E-cadherin）啟動(dòng)子區(qū)域，抑制其轉(zhuǎn)錄，從而誘導(dǎo)間質(zhì)表型[1]。因此，準(zhǔn)確定量ZEB1的表達(dá)水平對(duì)于理解結(jié)直腸癌進(jìn)展機(jī)制至關(guān)重要。ZEB1抗體作為檢測(cè)ZEB1蛋白表達(dá)的核心工具，被廣泛用于結(jié)直腸癌細(xì)胞系中ZEB1表達(dá)水平分析、上下游調(diào)控機(jī)制驗(yàn)證以及藥物干預(yù)效果評(píng)價(jià)。
ZEB1抗體用于檢測(cè)結(jié)直腸癌細(xì)胞中ZEB1的表達(dá)特征
多項(xiàng)研究采用ZEB1抗體通過(guò)Western blot和免疫組化技術(shù)，比較不同結(jié)直腸癌細(xì)胞系中ZEB1的蛋白表達(dá)水平。利用ZEB1抗體檢測(cè)人結(jié)直腸癌細(xì)胞HT29、LOVO、SW480以及人正常結(jié)直腸上皮細(xì)胞FHC中的ZEB1蛋白，結(jié)果顯示ZEB1在三種癌細(xì)胞中均呈高表達(dá)，且在高侵襲性LOVO細(xì)胞中表達(dá)最高[3]。同樣，采用ZEB1抗體對(duì)SW620和RKO細(xì)胞進(jìn)行Western blot檢測(cè)，證實(shí)這兩種細(xì)胞具有間質(zhì)特征，ZEB1蛋白水平較高[1]。這些研究充分說(shuō)明，ZEB1抗體能夠有效區(qū)分不同惡性程度細(xì)胞株的ZEB1表達(dá)差異，為進(jìn)一步功能實(shí)驗(yàn)提供了依據(jù)。
ZEB1抗體在驗(yàn)證miRNA靶向調(diào)控ZEB1中的作用
MicroRNA-141（miR-141）是ZEB1的上游負(fù)調(diào)控分子。研究中構(gòu)建了miR-141過(guò)表達(dá)的慢病毒Lenti-miR-141，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SW620和RKO細(xì)胞后，使用ZEB1抗體通過(guò)Western blot檢測(cè)ZEB1蛋白的變化。結(jié)果表明，與空載對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)miR-141的細(xì)胞中ZEB1蛋白表達(dá)明顯受到抑制[1]。這一發(fā)現(xiàn)不僅驗(yàn)證了miR-141對(duì)ZEB1的直接靶向作用，也凸顯了ZEB1抗體在miRNA-mRNA-蛋白調(diào)控軸驗(yàn)證環(huán)節(jié)中的關(guān)鍵地位。
ZEB1抗體用于評(píng)估藥物對(duì)ZEB1表達(dá)的影響
白花丹素是一種天然萘醌類化合物，具有抗腫瘤活性。研究白花丹素對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480增殖和凋亡的影響的實(shí)驗(yàn)中，采用不同濃度白花丹素處理細(xì)胞后，使用ZEB1抗體通過(guò)Western blot檢測(cè)ZEB1蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，隨著白花丹素濃度增加，ZEB1蛋白水平呈濃度依賴性下降，同時(shí)細(xì)胞活力降低、凋亡率升高[2]。進(jìn)一步的回復(fù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)ZEB1可部分逆轉(zhuǎn)白花丹素的抗腫瘤效應(yīng)，而這一結(jié)論同樣依賴于ZEB1抗體對(duì)ZEB1過(guò)表達(dá)效果的確認(rèn)[2]。因此，ZEB1抗體為闡明白花丹素的作用機(jī)制提供了直接證據(jù)。
ZEB1抗體在基因干擾功能研究中的驗(yàn)證作用
為探究ZEB1本身對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，研究者常采用shRNA或siRNA技術(shù)沉默ZEB1表達(dá)，而ZEB1抗體則是驗(yàn)證干擾效率的金標(biāo)準(zhǔn)。研究人員等將慢病毒pPLK-ZEB1-shRNA感染LOVO細(xì)胞后，使用ZEB1抗體進(jìn)行Western blot檢測(cè)，證實(shí)干擾組ZEB1蛋白水平顯著低于對(duì)照組[3]。在此基礎(chǔ)上，后續(xù)增殖、克隆形成、遷移和凋亡實(shí)驗(yàn)才得以可靠開展。這再次表明，ZEB1抗體在功能獲得或功能喪失研究中承擔(dān)著不可或缺的質(zhì)量控制角色。
參考文獻(xiàn)
[1] 尹杰, 王婷婷, 白志剛, 等. MiR-141通過(guò)其靶基因ZEB1、SIP1調(diào)控EMT途徑在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中的研究[J]. 臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 15(6): 515-519.
[2] 趙維波, 孔令甲, 敬長(zhǎng)春. 白花丹素調(diào)控鋅指E盒結(jié)合ZEB1的表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響[J]. 河北醫(yī)藥, 2022, 44(22): 3380-3383，3388.
[3] 鐘軒, 王紅鈺, 蔣濤, 等. 干擾ZEB1表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化與增殖、凋亡與遷移的影響[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志, 2019, 35(21): 3290-3295.