介紹
鉻花氰 R（Mordant Blue 3，C.I. 43820），又稱依來(lái)鉻氰藍(lán) R、鉻花青 R與 Solochrome cyanine R，是一類三苯甲烷類媒介染料。該染料自 1906 年起應(yīng)用于紡織工業(yè)染色，1957 年被引入生物組織染色領(lǐng)域，同時(shí)在分析化學(xué)中用作金屬離子指示劑與分光光度檢測(cè)試劑。2020 年，美國(guó)生物染色委員會(huì)（Biological Stain Commission, BSC）正式建立了該染料的生物染色認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步規(guī)范了其在組織學(xué)與病理學(xué)領(lǐng)域的質(zhì)量要求與應(yīng)用場(chǎng)景。
圖一 鉻花氰 R
特征
鉻花氰 R本質(zhì)是帶有多個(gè)可解離基團(tuán)的芳香磺酸化合物，存在色酸與三鈉鹽兩種商用形式。其溶液顏色具有顯著的 pH 依賴性：pH 4.0 的酸性條件下呈紅色，特征吸收峰位于 515 nm 附近；pH 12–13 的強(qiáng)堿性條件下形成四價(jià)陰離子，溶液呈藍(lán)色，特征吸收峰移至 585 nm。該強(qiáng)堿性體系下的吸收光譜不受微量鐵鹽等雜質(zhì)干擾，且在空氣與光照下穩(wěn)定性良好，因此被作為染料含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)體系。
市售鉻花氰 R通常混有硫酸鈉或氯化鈉等無(wú)機(jī)鹽填充劑，還含有少量黃色、橙色有機(jī)副產(chǎn)物，純?nèi)玖险急韧ǔ＜s為產(chǎn)品總重的一半。通過(guò)鹽酸沉淀出色酸、再經(jīng)氯仿萃取的方法可獲得高純度染料，用于氟離子、鋁、鐵等的微量分析；但生物染色場(chǎng)景下無(wú)需高度純化，一定含量的鹽類反而與已建立的經(jīng)典染色方案相匹配。此外，可通過(guò)簡(jiǎn)單的斑點(diǎn)試驗(yàn)快速定性鑒別該染料：濃硫酸中溶解呈紅色，加水稀釋后變黃并析出沉淀；水溶液中加氫氧化鈉后由紅變藍(lán)；95% 乙醇中呈橙黃色。
生物染色應(yīng)用
鉻花氰 R的生物染色應(yīng)用均依賴其與三價(jià)鐵離子形成的藍(lán)色金屬絡(luò)合物，主要用于細(xì)胞核染色與神經(jīng)組織髓鞘染色兩大類。
細(xì)胞核染色
與鐵離子配伍的鉻花氰 R 可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞核的選擇性藍(lán)色染色，操作流程分為漸進(jìn)式與退行式兩種，與常規(guī)蘇木精（hemalum）染色方法高度兼容。漸進(jìn)式染色通過(guò)醋酸鈉溶液洗去游離染料，5 分鐘即可完成染色；退行式染色則先過(guò)度染色，再經(jīng)酸性乙醇分色，可獲得更清晰的核質(zhì)對(duì)比度。兩種方法均能得到清晰的藍(lán)色細(xì)胞核，搭配伊紅復(fù)染后可實(shí)現(xiàn)經(jīng)典的紅藍(lán)對(duì)比效果，適用于常規(guī)組織學(xué)與病理切片染色。相較于傳統(tǒng)鋁 - 蘇木精染液，鐵-鉻花氰 R復(fù)合物的耐酸性更強(qiáng)，可替代 Weigert 鐵蘇木精，用于 Van Gieson 苦味酸 - 品紅染色、Masson 三色染色等后續(xù)含酸性試劑的染色流程，避免核染色被酸性溶液脫失。此外還有單液雙色染色方案，可在一次染色中同時(shí)實(shí)現(xiàn)藍(lán)色細(xì)胞核與紅粉色細(xì)胞質(zhì)的對(duì)比效果，操作更為簡(jiǎn)便。
圖二 細(xì)胞核染色
髓鞘染色
鉻花氰 R與鐵鹽配伍還可用于神經(jīng)組織的髓鞘退行性染色，髓鞘與紅細(xì)胞被特異性染為藍(lán)色，效果與經(jīng)典的 Luxol 固藍(lán) MBS（溶劑藍(lán) 38）高度相似。該方法室溫下僅需 15–20 分鐘染色，再經(jīng)鐵礬溶液分色 10–15 分鐘，全程 1 小時(shí)內(nèi)即可完成，遠(yuǎn)快于傳統(tǒng)固藍(lán)染色所需的 55–60℃孵育 18–24 小時(shí)。染色后可搭配中性紅等尼氏染料復(fù)染，同時(shí)顯示神經(jīng)元胞體與髓鞘結(jié)構(gòu)，是神經(jīng)組織學(xué)研究中高效便捷的髓鞘染色選擇[1]。
參考文獻(xiàn)
[1]C F ,A J K .Certification procedures used by the Biological Stain Commission for eriochrome cyanine R (C.I. 43820, Mordant blue 3).[J].Biotechnic & histochemistry : official publication of the Biological Stain Commission,2020,95(5):396-402.DOI:10.1080/10520295.2020.1748229.