簡(jiǎn)介

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)細(xì)胞是一種常用的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，其中CHO-GS細(xì)胞系統(tǒng)將外源蛋白的目的基因和谷氨酰合成酶(glutamine synthetase,GS)基因標(biāo)記的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染于CHO細(xì)胞。在缺乏細(xì)胞外谷氨酰胺的培養(yǎng)條件下，加入GS的抑制劑L-蛋氨酸磺酸鹽(L-methionine sulphoximine,MSX)可使GS基因及與之相連的目的蛋白基因一起擴(kuò)增，達(dá)到提高目的蛋白基因表達(dá)水平的目的，從而縮短篩選周期，提高蛋白表達(dá)水平，同時(shí)也保證了細(xì)胞處于較好的生長(zhǎng)狀態(tài)。但將L-蛋氨酸磺酸鹽加入細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程，可能使其引入到所表達(dá)的蛋白料液中，如目標(biāo)蛋白為重組蛋白藥物，L-蛋氨酸磺酸鹽在蛋白料液中的殘留可能給使用該重組蛋白藥物的患者帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)《中國(guó)藥典》三部(2020版)及人用藥品技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)理事會(huì)中的要求，應(yīng)對(duì)生物制藥工藝中可能出現(xiàn)的雜質(zhì)作出評(píng)估，其可能會(huì)影響藥品的安全性和有效性，而L-蛋氨酸磺酸鹽作為培養(yǎng)基中的添加物，應(yīng)被列為工藝相關(guān)雜質(zhì)，需對(duì)其殘留量進(jìn)行檢測(cè)[1]。

L-蛋氨酸磺酸鹽的性狀

含量檢測(cè)方法

L-蛋氨酸磺酸鹽是蛋氨酸的特殊衍生物，具有氨基酸的基本結(jié)構(gòu)(氨基、羧基、R基側(cè)鏈)，因此其化合物極性較強(qiáng)、紫外吸收較弱，給其殘留量檢測(cè)帶來(lái)了一定的困難。目前對(duì)L-蛋氨酸磺酸鹽的檢測(cè)文獻(xiàn)報(bào)道多為衍生法，但衍生法存在操作步驟較復(fù)雜、衍生物不穩(wěn)定及衍生試劑存在毒性等缺點(diǎn)。GELSOMINO等采用鄰苯二甲醛(O-phthalaldehyde)衍生法檢測(cè)L-蛋氨酸磺酸鹽含量，但衍生物不穩(wěn)定，需立即進(jìn)樣分析；張文宇等采用三乙胺和異硫氰酸苯酯衍生方法檢測(cè)MSX含量，在1.5626 ~ 50 μmol/L范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性關(guān)系，但該方法衍生程序復(fù)雜，衍生時(shí)間較長(zhǎng)；張存超等采用6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞胺氨基甲酸酯衍生法檢測(cè)L-蛋氨酸磺酸鹽含量，檢測(cè)下限為5 μmol/L，但該方法需先將樣品用醋酸調(diào)節(jié)pH至5.5，過(guò)濾后再進(jìn)行衍生反應(yīng)。偶有文獻(xiàn)報(bào)道采用非衍生方法，但需借助較昂貴的檢測(cè)器，CHIN等采用Acclaim Trinity P1色譜柱結(jié)合電霧式檢測(cè)器對(duì)L-蛋氨酸磺酸鹽進(jìn)行分析，其色譜峰保留時(shí)間約為3 min，同時(shí)考察了甲酸銨濃度、流動(dòng)相pH、有機(jī)相比例及柱溫對(duì)其保留時(shí)間的影響，發(fā)現(xiàn)上述參數(shù)的變化對(duì)L-蛋氨酸磺酸鹽的保留時(shí)間影響很小[1]。

參考文獻(xiàn)

[1] 王立志,楊嘉明,李本強(qiáng),等. 重組蛋白藥物中L-蛋氨酸亞砜亞胺殘留量反相離子對(duì)色譜檢測(cè)方法的建立與驗(yàn)證 [J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志, 2025, 38 (4): 450-456+461. DOI:10.13200/j.cnki.cjb.004457